首页 > 医学实验 > ​ SNP

​ SNP

单核苷酸多态性主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种,占所有已知多态性的90%以上。SNP在人类基因组中广泛存在,平均每300个碱基对中就有1个,估计其总数可达300万个甚至更多。SNP是一种二态的标记,由单个碱基的转换或颠换所引起,也可由碱基的插入或缺失所致。SNP既可能在基因序列内,也可能在基因以外的非编码序列上。

相关实验

实验承诺函

咨询记录

技术文章

城市

咨询内容

时间

江苏省无锡市

咨询​ SNP服务相关

2024-05-22 02:31:24

国外

咨询​ SNP服务相关

2024-05-21 23:05:22

江苏省苏州市

咨询​ SNP服务相关

2024-05-21 00:02:42

国外

咨询​ SNP服务相关

2024-05-20 23:01:14

福建省三明市

咨询​ SNP服务相关

2024-05-20 10:18:48

江苏省常州市

咨询​ SNP服务相关

2024-05-20 09:05:16

河北省沧州市

咨询​ SNP服务相关

2024-05-20 06:14:38

国外

咨询​ SNP服务相关

2024-05-19 20:18:53

河北省沧州市

咨询​ SNP服务相关

2024-05-19 04:24:08

国外

咨询​ SNP服务相关

2024-05-18 20:00:03

核质分离实验QPCR数据处理

2024-01-15 15:05:16

QPCR数据分析以及作图方法

2024-01-11 14:23:33

QPCR实验设计【QPCR实验外包】

2024-01-10 17:03:29

QPCR原理和主要的三个步骤

2024-01-09 17:37:18

QPCR原理以及数据处理

2024-01-05 14:09:57

QPCR检测实验详细的步骤与报告(三)

2024-01-05 13:07:01

QPCR检测实验详细的步骤与报告(二)

2024-01-04 17:05:09

QPCR检测实验详细的步骤与报告(一)

2024-01-04 13:48:46

QPCR检测的是什么?

2024-01-03 17:34:53

WB检测实验报告和详细的操作步骤(下)

2023-12-21 14:42:54

WB检测实验报告和详细的操作步骤(中)

2023-12-21 13:36:16

WB检测实验报告和详细的操作步骤(上)

2023-12-20 16:36:30

什么是western blot?

2023-12-20 14:22:03

PCR设计引物的具体步骤【科研干货】

2023-11-17 13:59:50

引物设计的依据【小白适用】

2023-11-16 14:40:06

qPCR引物设计流程【一文搞懂】

2023-11-16 13:11:45

如何巧妙设计引物?

2023-11-14 17:29:47

关于SNP检测流程和应用

2023-03-29 11:24:18

做酶联免疫吸附剂测定实验需要注意什么?

2023-03-27 16:28:08

实时荧光定量 PCR(qPCR)的介绍

2023-03-20 13:08:33

WB实验检测介绍——检测小鼠组织中GSTM2的表达

2023-03-17 14:12:46

WB实验原理及流程图

2023-03-16 16:25:48

亚硫酸氢钠测序(BSP)实验步骤【BSP外包】

2022-11-22 15:00:00

什么是亚硫酸氢钠测序?【甲基化检测外包】

2022-11-18 15:47:24

DNA染色法检测支原体操作步骤【支原体检测外包】

2022-11-04 10:39:27

培养法检测支原体操作步骤【支原体检测外包】

2022-11-04 10:22:06

PCR检测支原体操作步骤【支原体检测外包】

2022-11-03 17:25:02

支原体检测方法大全【支原体检测外包】

2022-11-02 17:03:33

什么是支原体检测?【支原体检测外包】

2022-10-27 17:48:46

SNP检测常见问题答疑下篇

2022-08-09 19:14:35

SNP检测常见问题答疑上篇

2022-08-09 11:24:24

直接测序法检测SNP详解——最常用的方法

2022-08-05 08:58:37

Taqman探针法检测SNP分型详解

2022-08-04 15:12:43

SNP检测方法总结,有你用过的吗?

2022-08-02 17:56:41

SNP/单核苷酸多态性检测最常用的三种方法

2022-08-02 15:23:47

什么是SNP/单核苷酸多态性?

2022-08-02 14:16:49

​实时荧光定量PCR实验技术答疑

2022-07-28 13:55:45

实时荧光定量PCR常见问题及解决方法

2022-07-27 17:12:19

荧光定量PCR实操注意事项,注意避雷!

2022-07-27 11:49:18

荧光定量PCR结果分析解读—荧光定量PCR外包

2022-07-26 11:17:27

荧光定量PCR实验操作步骤,你做对了吗?

2022-07-25 17:11:08

什么是实时荧光定量PCR?

2022-07-22 10:18:49

六种甲基化检测方法【附视频教程】

2022-05-16 17:09:40

DNA甲基化实验操作步骤

2022-05-13 11:52:54

​DNA甲基化实验介绍【科研小白】

2022-05-13 10:27:04

ELISA酶联免疫吸附实操作常见问题处理方法【干货满满】

2022-04-08 16:34:54

ELISA酶联免疫吸附实验操作常见问题答疑【附视频教程】

2022-04-07 17:30:33

ELISA酶联免疫吸附实验操作注意事项【附视频教程】

2022-04-07 16:07:13

ELISA酶联免疫吸附实验详细操作步骤【附视频教程】

2022-04-07 13:27:43

科研小白看的ELISA酶联免疫吸附实验简介与原理【附视频教程】

2022-04-06 16:01:15

高分文章都怎么研究m6A甲基化

2022-01-10 14:50:24

DNA甲基化提高癌细胞对EGFR抑制剂敏感性的原因

2021-10-27 00:29:41

高分文章研究RNA甲基化详细步骤

2021-10-26 17:19:51

m6A甲基化研究思路设计方法

2021-10-26 15:44:54

Nature子刊 | DNA甲基化 甲基转移酶异位靶向拟南芥中CG

2021-05-27 17:59:59

实时荧光定量PCR检测步骤和注意事项【附视频教程】

2021-04-26 21:06:57

甲基化检测的几种方法和实验流程【附视频教程】

2021-04-23 11:19:00

细胞因子检测方法怎么选?常用检测方法优缺点整理

2021-04-12 15:25:26

这是我见过的WB结果图最多的文章!【文献解读】

2020-12-17 15:53:24

如何搞定Western Blot中的“奇葩”条带【干货文章】

2020-12-11 15:32:22

免疫沉淀及Pulldown这些方法原理你了解多少【新手入门】

2020-12-11 15:01:28

WB实验技术介绍【新手入门】

2020-12-11 14:59:38

查看更多
收起

​实验介绍

taqman探针法:针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时,该探针与模板退火,即产生了适合于核酸外切酶活性的底物,从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来,破坏两荧光分子间的PRET,发出荧光。通常用于少量SNP位点分析。

高分辨率熔解曲线分析(HRM)是近几年兴起的SNP研究工具,它通过实时监测升温过程中双链DNA荧光染料与PCR扩增产物的结合情况,来判断是否存在SNP,而且不同SNP位点、是否是杂合子等都会影响熔解曲线的峰形,因此HRM分析能够有效区分不同SNP位点与不同基因型。这种检测方法不受突变碱基位点与类型的局限,无需序列特异性探针,在PCR结束后直接运行高分辨率熔解,即可完成对样品基因型的分析。该方法无需设计探针,操作简便、快速,成本低,结果准确,并且实现了真正的闭管操作。


图:某基因的SNP(G>A)进行HRM分析的结果。左图为熔解曲线,右图为差异图


SNaPshot法:是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术,也称小测序,主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪检测后,根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点,根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析(见下图)。


直接测序法:在所有SNP的检测方法中,对待检测片段进行直接扩增、测序是最为准确的方法,也是SNP分析的金标准。纯合型SNP位点的测序峰为单一峰型,而杂合型SNP位点的测序峰为套峰,因而很容易将其区分开来。通过直接测序方法进行SNP检测的检出率接近100%。该技术主要通过直接测序的方法来确定位点的基因型,这种分型方法准确性最高,但费用大。如果需要检测的几个SNP位点正好位于一个测序单元内(长度小于700bp),则单个位点的分型费用可显著降低,这种分型技术不失为一种良好选择。对于准确性要求特别高或样本量特别小(几个或几十个)的项目,这种分型技术很适合。


【实验流程】



探针匹配:可以收集荧光;

探针不匹配:不能收集荧光。

案例展示

SNP_副本.jpg

送检与交付标准

样品类型样品需求保存条件运输条件备注
动物组织单个样品>0.1g,2mlEP管或冻存管装,不要过量;样本应尽量新鲜,如不能立即提取蛋白或核酸,应液氮速冻后冻存于-80℃或更低,冻存样本避免反复冻融以致降解-80℃干冰所有样本均须有唯一标记,且标记清晰可识
种子样本去壳新鲜或保存于液氮中的的种子样本,单个样品>0.2g。-80℃干冰
贴壁/悬浮细胞

1. 总RNA或蛋白:106cell/指标、浆/核RNA或蛋白:107cell/指标、线粒体RNA或蛋白:2*107     cell/指标,样本尽量新鲜,细胞收取后直接加Trizol(QPCR检测)或直接冻存于-80℃       

2. 若细胞处理(加药、转染、感染)后状态差应酌情加大收样量

-80℃干冰
全血/血清样品用抗凝管保存的外周血 5~10ml,骨髓 1~3ml; -80℃保存不超半周的白细胞匀浆>400μl,每 400μl 加入 400μl Trizol。-80℃干冰
石蜡包埋样品由标准的石蜡包埋盒包埋的石蜡块,有效厚度大于 0.1cm; 新鲜的 FFPE 组织切片,每片厚度不超过 10μm,2~8 张,表面积不超过 250mm2。-20℃冰袋
抗体

1. 按样本种属提供满足相应实验要求的抗体;

2. 按抗体说明书要求寄送,尽量避免分装;如分装,确保量足够进行实验,并提供抗体说明书。

3.保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记,抗体的量应大于实验所需的量。

-20℃冰袋
引物干粉,≥1OD,如进行预实验,每个基因至少提供两对引物, 附带公司引物合成单。-20℃冰袋或常温




细胞交付标准.jpg