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科研小白看的ELISA酶联免疫吸附实验简介与原理【附视频教程】

2022-04-06 16:01:15

来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台

   ELISA酶联免疫吸附实验简介与原理由普拉特泽生物旗下生物科研培训品牌——《春风学院》给大家详细讲解,普拉特泽生物为广大科研人员提供线下生物医学实验外包服务,同时为提高大家的基础医学实验操作技能,特地开办线上下实验操作培训班,一起来从ELISA实验开始学吧。


   以前经常听到学长学姐天天说ELISA,科研小白因为上课不认真,听得有些迷迷糊糊,有个五六分懂,本文就给小白们从简介原理分类方法细细讲讲,梳理夯实一下基础。


   什么是ELISA酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,简称ELISA

   酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等,具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。

   ELISA酶联免疫吸附实验原理是:

   1)使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。

   2)使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。


   ELISA酶联免疫吸附实验方法:

   1、直接法ELISA:其方法是将抗原按一定的比例稀释好包被到固相载体上,然后加入稀释好的特异性的酶标抗体,孵育后加入底物显色并判读结果。直接ELISA操作很简单,步骤也比较简练,但是其应用范围还是非常有限的,一个重要的原因是这种ELISA中只经过了一步信号放大(酶的放大),所以其灵敏度不是很高;另外,其测定的对象也非常有限,只能测定酶标记的分子。

   2、间接法ELISA一般用来检测抗体。其基本原理是:将一定量的抗原物包被于聚苯乙烯微孔板,加入无关蛋白载体封闭未结合位点后,加入待测样本,然后加入酶标二抗,经孵育和洗涤后,加底物显色。本法只要更换不同的固相抗原,可以用一种酶标抗体检测各种与抗原相应的抗体。主要用于对病原体的检测而进行传染病的诊断。

   3、夹心法ELISA其基本原理是将一定量的包被抗体以物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面,加入无关蛋白载体封闭未结合位点,然后加入含有抗原之待测样品,通过加入酶标记特异性抗体后用TMB底物显色,微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈正相关。该方法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。

   4、竞争法ELISA首先将特异性抗体吸附于固相载体表面,经洗涤后分成两组:一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液;而另一组只加酶标记抗原,再经孵育洗涤后加底物显色,这两组底物降解量之差,即为所要测定的未知抗原的量。这种方法所测定的抗原只要有一个结合部位即可,因此,对小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。

   好啦,那关于ELISA的原理方法小编就讲完啦,如果您有ELISA实验需要外包请认准普拉特泽~还有不懂的欢迎随时留言~我们的技术支持们会专业认真给大家解答噢~我们就下期见!

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