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实验原理
酪酰胺信号放大 (TSA) 技术是一类利用辣根过氧化酶 (HRP) 对靶蛋白进行标记的酶学检测方法,类似常规免疫组化的DAB显色方法,TSA技术同样采多聚HRP的二抗,同样有对应的“显色”步骤,HRP催化加入反应体系的酪胺荧光素底物,产生活化荧光底物,活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合,使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。之后用热修复法洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP复合物,重复下一种一抗-HRP二抗来第二轮孵育,换另一种酪胺荧光素底物,如此往复就可实现多重标记。
实验步骤
实验案例
【技术特点】
由于每次体系中都只有单一抗体孵育,因此无需担心抗体交叉反应以及一抗二抗种属匹配问题,大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。也就是说,如果用TSA技术,同一张片子上所有的靶标都可以选用特异性高的兔单克隆抗体。搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以进行实验。
一、一键解决荧光多色染色中一抗来源的种属限制问题。
二、信号放大,荧光信号放大的倍数指数性增强。
三、可以对多种蛋白在同一张切片上进行不同荧光标记,实现多种蛋白共定位。
【注意事项】
切片加入抗荧光猝灭剂后,4℃避光仅可保存1-2个月。
送检与交付与标准