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粒细胞检测

粒细胞可由其在瑞氏染色下的表现分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞三类,绝大部分的粒细胞是中性粒细胞。 中性粒细胞的7个阶段标记物:粒单系祖细胞、原始粒细胞、早幼粒细胞、中幼粒细胞、晚幼粒细胞、杆状核、分叶核。

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实验介绍

【技术原理】

       流式利用不同荧光物质标记的单克隆抗体,与待测成分作用,然后上流式细胞仪检测待测细胞。待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列,一个个迅速通过激光聚焦区,激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物发出的信号,利用这些信号,可计算出相对含量,从而得到细胞群的相对比值。

粒细胞可由其在瑞氏染色下的表现分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞三类,绝大部分的粒细胞是中性粒细胞。 中性粒细胞的7个阶段标记物:粒单系祖细胞、原始粒细胞、早幼粒细胞、中幼粒细胞、晚幼粒细胞、杆状核、分叶核。

我们常用的检测指标

中性粒细胞(人):CD15、CD16、CD49d(-)

噬碱性粒细胞(人):CD123、CD203c、CD117(-)

噬酸性粒细胞(人):CD11b、CD193、EMR1

中性粒细胞(鼠):CD11b、 Ly6G、CD115(-)

噬碱性粒细胞(鼠):CD200R3、  FcεRIα

噬酸性粒细胞(鼠):CD11b、  CD193、  F4 / 80


【实验流程】

Step1:制成单细胞悬液(组织样本)

Step2:溶血(细胞样本无需进行此步骤)

Step3:离心去上清

Step4:调整细胞密度

Step5:加入相应的标记抗体

Step6:孵育

Step7:洗涤后离心去上清

Step8:上机检测

注意事项

1、为保证所得结果的可靠性,每次实验前应用标准荧光微球检测仪器的变异系数;

2、每次应做阴性对照、阳性对照、质控对照、以确保将各种试剂及操作过程对结果的影响降至最低;

3、外周血单个核细胞(PBMC)是一些科研实验中经常用的材料,是利用Ficoll从全血中提取得到,主要为淋巴细胞和单核细胞;需要检测粒细胞等多形核细胞,就需要避免用PBMC需提供全血。

送检与交付标准

样品类型样品需求运输条件
组织离体后组织制成单细胞悬液,加入PBS培养基内常温运输
活细胞样本量:1*106个细胞/TEST,加入PBS培养基内常温运输
血液将血液采集在EDTA肝素钠的抗凝采血管内常温运输



流式交付标准.jpg