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实验介绍
【技术原理及背景】
研究启动子结合蛋白的经典方法，是一种用于定性和定量分析核酸蛋白相互作用的技术，其基本原理是末端标记的核酸探针可以与蛋白质结合，电泳时这种复合物相对没有结合蛋白的探针在凝胶中移动的速度慢，即表现为相对滞后。该方法不仅简单迅速且灵敏度高；另一方面它可以用竞争性试验来评价蛋白和核酸结合的特性。目前用于检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白，并可通过加入特异性抗体来检测特定的蛋白质，结合蛋白双向电泳及质谱技术进行未知蛋白的鉴定分析。
【技术应用】
1. 用于检测某一特定的DNA或RNA序列与某一个特定的蛋白质之间是否存在相互作用关系。
2. 用于验证预测结合的核苷酸序列。
【实验原理】
案例展示
实验优缺点
优势：
1. 可用目的蛋白的重组蛋白与DNA或RNA探针进行验证，避免非常规物种缺少抗体的困扰。
2. 是用于验证反式作用因子（如转录因子）与正式作用元件（如启动子）结合的经典技术。
3. 可定义核酸序列与蛋白质的直接互作关系。
4. 可分析结合位点（设计野生型及突变型探针）。
不足：
1. 探针为人工合成，无法完全模拟特定生理状态下的结合。
2. 如果是用于检测转录因子活性，无法判断结合启动子后对靶基因的转录活性。
3. 必须已知DNA或RNA序列，才能设计探针。
送检及交付标准
| 样品类型 | 样品需求 | 保存条件 | 运输条件 | 备注 |
|---|---|---|---|---|
| 动物组织 | 单个样品>0.1g，2mlEP管或冻存管装，不要过量；样本应尽量新鲜，如不能立即提取蛋白或核酸，应液氮速冻后冻存于-80℃或更低，冻存样本避免反复冻融以致降解 | -80℃ | 干冰 | 所有样本均须有唯一标记，且标记清晰可识 |
| 种子样本 | 去壳新鲜或保存于液氮中的的种子样本，单个样品>0.2g。 | -80℃ | 干冰 | |
| 贴壁/悬浮细胞 | 1. 总RNA或蛋白：106cell/指标、浆/核RNA或蛋白：107cell/指标、线粒体RNA或蛋白：2*107 cell/指标，样本尽量新鲜，细胞收取后直接加Trizol（QPCR检测）或直接冻存于-80℃ 2. 若细胞处理（加药、转染、感染）后状态差应酌情加大收样量 | -80℃ | 干冰 | |
| 全血/血清样品 | 用抗凝管保存的外周血 5~10ml，骨髓 1~3ml； -80℃保存不超半周的白细胞匀浆>400μl，每 400μl 加入 400μl Trizol。 | -80℃ | 干冰 | |
| 石蜡包埋样品 | 由标准的石蜡包埋盒包埋的石蜡块，有效厚度大于 0.1cm； 新鲜的 FFPE 组织切片，每片厚度不超过 10μm，2~8 张，表面积不超过 250mm2。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 抗体 | 1. 按样本种属提供满足相应实验要求的抗体； 2. 按抗体说明书要求寄送，尽量避免分装；如分装，确保量足够进行实验，并提供抗体说明书。 3.保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记，抗体的量应大于实验所需的量。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 引物 | 干粉，≥1OD，如进行预实验，每个基因至少提供两对引物， 附带公司引物合成单。 | -20℃ | 冰袋或常温 |
电话：400-691-6686
在线时间：8:00-24:00
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