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血管生成

血管生长是肿瘤发生的关键步骤。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤,一旦生长直径超过1~2 mm,都会有血管生成,这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子,诱导血管生成。

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2024-04-16 10:46:17

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2024-04-15 23:58:29

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实验介绍

【应用简介】

血管生长是肿瘤发生的关键步骤。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤,一旦生长直径超过1~2 mm,都会有血管生成,这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子,诱导血管生成。多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速,因此,血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用,抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。体外的血管生成实验能很好的模拟肿瘤的血管发生过程,并且适合研究药物对这一过程的影响。


【技术原理】

应用Matrigel模拟机体环境,上面接种肿瘤细胞,观察血管生成情况。


【实验方法】

Step1:细胞培养

Step2:细胞转染或药物处理

Step3:铺Matrigel胶

Step4:接种细胞

Step5:观察血管生成情况

案例展示

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与对照组相比,处理因素能够明显抑制血管生成。

技术总结

1、实验前一天需要将Matrigel置于冰盒,放入冰箱中,同时需要准备一些预冷的枪头用于吸取Matrigel胶;

2、将Matrigel胶加到血管生成载玻片时注意枪头要垂直于内孔的正上方加入Matrigel,防止有Matrigel流经上孔而留下残留胶;

3、需要按照细胞的生长速度定时采集图像,并且对其成管长度、覆盖面积、成环数和结点进行测量和记录,并且对其进行统计分析;

4、分上下孔的ibidi血管生成载玻片能去除凹液面,使成像效果更好。

送检与交付标准

样品类型样品需求保存条件运输条件备注
冻存细胞

1.取对数生长期的细胞,消化离心收集细胞,加入冻存液吹打混匀,装入冻存管,标明细胞名称/细胞代数,冻存细胞数量在1-5*106个/ml。

2.项目启动后细胞复苏,复苏后3天反馈细胞状态,3-5天反馈细胞污染情况,5-7天反馈支原体污染情况。

3. 细胞详细信息(名称、培养基和其他培养条件等,如经过特别处理需告知并提供必要的信息)

液氮干冰所有样本均须有唯一标记,且标记清晰可识
复苏后细胞

1.使用T25培养瓶运输。细胞汇合度达到60%以上,装满培养液,只留纽扣大小的气泡,瓶口用封口膜封好,标明细胞名称/细胞代数/接种时间/培养基类型,瓶子固定运输。

2.收到细胞后3天反馈细胞状态,3-5天反馈细胞污染情况,5-7天反馈支原体污染情况。

3. 细胞详细信息(名称、培养基和其他培养条件等,如经过特别处理需告知并提供必要的信息)

常温常温
质粒

1.纯度高,无内毒素,无蛋白质,基因组DNA/RNA污染,质粒A260:A280的比值在1.8-2.0之间

2.浓度不低于0.5μg/μl,总量大于100μg,无内毒素处理

3. 载体详细信息,包括名称、大小、抗性、荧光标记

-20℃冰袋
病毒

1.慢病毒:滴度不低于1*108TU/ml,体积约200μl,标明制备时间,且没有反复冻融

2.腺病毒:滴度不低于1*109PFU/ml,体积约200μl,标明制备时间,且没有反复冻融

3.明确是否表达荧光标签蛋白及其种类,最好需要提供病毒载体图谱;

-80℃干冰




细胞交付标准.jpg