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实验介绍
【技术原理】
在斑点杂交中,要检测到的生物分子不是首先通过电泳分离出来的,相反,将含有被检测分子的混合物直接点在膜上,烘烤固定。然后用核苷酸探针(Northern blot、Southern blot)或抗体(Western blot)杂交后检测。这种方法耗时短,可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品。
【实验方法】
(1)DNA斑点杂交:
①.先将膜在水中浸湿,再放到15×SSC中。
②.将DNA样品溶于水或TE,煮沸5min,冰中速冷。
③.用铅笔在滤膜上标好位置,将DNA点样于膜上,每个样品一般点5μl(2-10μg DNA)。
④.将膜烘干,密封保存备用。
(2)RNA斑点杂交:
与上法类似,每个样品至多加10μg总RNA(经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化),方法是将RNA溶于5μl DEPC水,加5μl甲醛/SSC缓冲液(10×SSC中含6.15mol/L甲醛),使RNA变性,然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上,烘干。
(3)蛋白斑点杂交:
①.先将PVDF膜在甲醇中浸湿,再放到PBS中,然后用滤纸吸干表面水渍。
②.将蛋白样本变性处理,取2μl点样于膜上,烘干。
优秀案例展示
送检与交付标准
【交付标准】
1. 实验报告
2. 真实实验结果
3. 原始图片
4. 实验原始数据
5. 剩余物料在周期内可返还(超过周期,不予返还)
【送检流程】