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Dot Blot

Dot Blot(斑点杂交或缝隙印迹)是分子生物学中用于检测生物分子,检测、分析和鉴定蛋白质/核酸的一种技术。它是对Northern blot、Southern blot或Western blot方法的简化。

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实验介绍

【技术原理】


在斑点杂交中,要检测到的生物分子不是首先通过电泳分离出来的,相反,将含有被检测分子的混合物直接点在膜上,烘烤固定。然后用核苷酸探针(Northern blotSouthern blot)或抗体(Western blot)杂交后检测。这种方法耗时短,可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品。

【实验方法】


1)DNA斑点杂交:

.先将膜在水中浸湿,再放到15×SSC中。

.DNA样品溶于水或TE,煮沸5min,冰中速冷。

.用铅笔在滤膜上标好位置,将DNA点样于膜上,每个样品一般点5μl2-10μg DNA)。

.将膜烘干,密封保存备用。

2)RNA斑点杂交:

与上法类似,每个样品至多加10μgRNA(经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化),方法是将RNA溶于5μl DEPC水,加5μl甲醛/SSC缓冲液(10×SSC中含6.15mol/L甲醛),使RNA变性,然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上,烘干。

3)蛋白斑点杂交:

①.先将PVDF膜在甲醇中浸湿,再放到PBS中,然后用滤纸吸干表面水渍。

②.将蛋白样本变性处理,取2μl点样于膜上,烘干。

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送检与交付标准

【交付标准】

1. 实验报告 

2. 真实实验结果

3. 原始图片

4. 实验原始数据

5. 剩余物料在周期内可返还(超过周期,不予返还)


【送检流程】