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细胞内活性氧检测

荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测。DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。

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实验介绍

【技术原理】

荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测。DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。细胞内活性氧的升高是细胞凋亡的标志之一。

 

【实验流程】

Step1:制成单细胞悬液(组织样本)

Step2:溶血(细胞样本无需进行此步骤)

Step3:离心去上清

Step4:调整细胞密度

Step5:加入相应的荧光探针

Step6:孵育

Step7:洗涤后离心去上清

Step8:上机检测


细胞活性氧检测实验流程.png

注意事项

1、为保证所得结果的可靠性,每次实验前应用标准荧光微球检测仪器的变异系数;

2、每次应做阴性对照、阳性对照、质控对照、以确保将各种试剂及操作过程对结果的影响降至最低;

3、细胞应保持良好的活性状态,否则对结果影响较大。

送检与交付标准

样品类型样品需求运输条件
组织离体后组织制成单细胞悬液,加入PBS培养基内常温运输
活细胞样本量:1*106个细胞/TEST,加入PBS培养基内常温运输
血液将血液采集在EDTA肝素钠的抗凝采血管内常温运输




流式交付标准.jpg