相关实验
实验承诺函
咨询记录
技术文章
城市
时间
福建省泉州市
2024-11-06 11:23:20
福建省三明市
2024-11-06 06:24:33
浙江省温州市
2024-11-05 20:59:35
浙江省金华市
2024-11-05 10:43:54
江苏省泰州市
2024-11-05 10:25:45
河北省沧州市
2024-11-05 03:57:43
江苏省苏州市
2024-11-05 02:28:57
江苏省泰州市
2024-11-04 18:47:36
江苏省苏州市
2024-11-04 06:17:00
浙江省温州市
2024-11-03 22:19:15
克隆形成
【应用简介】
克隆形成及细胞克隆接种存活率,通过观察单细胞集落形成情况,来计算克隆形成率,了解其增殖能力。
【技术原理】
单个细胞在体外持续增殖6代以上时细胞数量已达60个左右,此细胞群体成为克隆或集落,大小在1.0-2.0 mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力,各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变,通过计数克隆形成率,可对单个细胞的增殖潜力做定量分析,了解细胞的增殖率和对生存环境的适应性。软琼脂培养或平板克隆是最常用的方法。
【实验方法】
Step1:细胞培养,调整细胞状态
Step2:制备单细胞悬液
Step3:按不同的细胞浓度梯度把细胞均匀接种于培养平板
Step4:培养一段时间
Step5:观察克隆情况,固定染色后计算克隆形成率
案例展示
不同肿瘤细胞的平板克隆
技术总结
1、对数生长期,细胞状态良好的情况下,0.25%胰酶消化,离心后重悬时一定要吹打成单细胞悬液。可以选择6孔板作为克隆培养板,按密度梯度(如100、200、300)接种进孔板中。接种后切记晃动平板,使细胞分布均匀。
2、培养2周左右(出现肉眼可见细胞集落时),即可固定染色。加固定液和染色液时,覆盖住孔板底层即可。但如果长时间不处理,需增加液体量,防止液体干涸,影响拍照效果。
3、拍照时,务必使每个孔中无阴影,如无法达到,则逐个孔进行拍照。
送检与交付标准
样品类型 | 样品需求 | 保存条件 | 运输条件 | 备注 |
---|---|---|---|---|
冻存细胞 | 1.取对数生长期的细胞,消化离心收集细胞,加入冻存液吹打混匀,装入冻存管,标明细胞名称/细胞代数,冻存细胞数量在1-5*106个/ml。 2.项目启动后细胞复苏,复苏后3天反馈细胞状态,3-5天反馈细胞污染情况,5-7天反馈支原体污染情况。 3. 细胞详细信息(名称、培养基和其他培养条件等,如经过特别处理需告知并提供必要的信息) | 液氮 | 干冰 | 所有样本均须有唯一标记,且标记清晰可识 |
复苏后细胞 | 1.使用T25培养瓶运输。细胞汇合度达到60%以上,装满培养液,只留纽扣大小的气泡,瓶口用封口膜封好,标明细胞名称/细胞代数/接种时间/培养基类型,瓶子固定运输。 2.收到细胞后3天反馈细胞状态,3-5天反馈细胞污染情况,5-7天反馈支原体污染情况。 3. 细胞详细信息(名称、培养基和其他培养条件等,如经过特别处理需告知并提供必要的信息) | 常温 | 常温 | |
质粒 | 1.纯度高,无内毒素,无蛋白质,基因组DNA/RNA污染,质粒A260:A280的比值在1.8-2.0之间 2.浓度不低于0.5μg/μl,总量大于100μg,无内毒素处理 3. 载体详细信息,包括名称、大小、抗性、荧光标记 | -20℃ | 冰袋 | |
病毒 | 1.慢病毒:滴度不低于1*108TU/ml,体积约200μl,标明制备时间,且没有反复冻融 2.腺病毒:滴度不低于1*109PFU/ml,体积约200μl,标明制备时间,且没有反复冻融 3.明确是否表达荧光标签蛋白及其种类,最好需要提供病毒载体图谱; | -80℃ | 干冰 |