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IHC染色/免疫组化

抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量。

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实验介绍

【技术原理】

抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量。


【实验流程】


IHC免疫组化.png

案例展示


ihc染色.jpg

 

技术总结

 【常见问题】

1、无/弱染色

     烤片温度过高,推荐56℃-60℃1-2h;

     一抗是否适用固定液和石蜡切片,使用浓度是否过低,孵育是否时间过短等。


2、非特异性背景染色

    是否灭活内源性过氧化物酶;

    孵育过程中干片;

    抗原热修复过度。


3、染色过深

    一抗浓度过高;
           染色试浓度过高或孵育时间过长;
           染色剂浓度过高或孵育时间过长。



【注意事项】

1、使用3%过氧化氢溶液消除内源性过氧化酶活性时,请勿孵育过长时间,一般为5—10分钟;

2、对于较易产生脱片的部分组织如皮肤、骨组织、脑组织等尽量避免使用微波修复和高压修复,减少其脱片的风险;

3、使用DAB显色时,显色剂停留时间过长会造成染色过深,可根据实验温度及实验结果适当调整染色时间。

送检和交付标准

样品类型样品需求保存条件运输条件备注
新鲜组织新鲜取材组织,用 PBS 清洗干净血液等,立即-80℃保存-80℃干冰所有样本均须有唯一标记,且标记清晰可识
一般固定组织一般组织体积不超过2cmX2cmX0.5cm,固定时尽量保持组织的原有形态并清理干净血液及多余部分,如肠道内容物;固定液体积为组织大小的10倍以上,容器足够容纳组织不使其挤压变形。标注好固定液类型和固定时长常温常温
特殊固定组织睾丸、眼球、脊髓、肌肉等组织:推荐使用对应的特殊固定液进行固定,以保证固定效果。如Bouin液,适用于睾丸组织、皮肤组织及眼球的固定

组织蜡块组织由标准的石蜡包埋盒包埋(尺寸为30*24*7mm),石蜡与组织要均匀接合,不能有裂痕;蜡块厚度根据所需切片的数量而定,有效厚度至少要超过 0.1cm。尽量提供半年内的组织蜡块,超过半年的蜡块抗原可能丢失,做免疫组化可能出现检测不到蛋白。常温常温
组织切片需用防脱载玻片进行捞片,并注明切片厚度、已烤片温度与时间,组织应在靠近切片下端 1/3 处。4℃冰袋
细胞爬片使用 12 孔板或 24 孔板专用细胞爬片,细胞爬片经固定后用 PBS 洗涤 2~3 次,保存在 PBS 中,用封口膜密封孔板。每个爬片在孔板盖上应有唯一的标记,并有电子版的分组信息,以防标记在运输途中模糊。常温常温
植物样本新鲜组织FAA固定,木质化程度不高;对于较薄的叶片,如果要求平行叶片切片,难以保证切完整;根茎要求直径>1mm常温常温
抗体保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记,并附带说明书,抗体的量应大于实验所需的量。组织切片、组织芯片按稀释后 100μl 一张切片计算抗体用量, 24 孔板细胞爬片圆形盖玻片按稀释后 200μl 一张计算抗体用量,12 孔板细胞爬片圆形盖玻片按稀释后 400μl 一张计算抗体用量。-20℃冰袋或干冰




病理交付标准.jpg