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实验介绍
【技术原理】
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180~200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素、生物素标记的dUTP，从而可以通过荧光显微镜或化学显色方法检测细胞凋亡的情况。
【实验流程】
案例展示
技术总结
【常见问题】
1、无/弱染色
烤片温度过高，推荐56℃-60℃1-2h；
一抗是否适用固定液和石蜡切片，使用浓度是否过低，孵育是否时间过短等。
2、染色过深
染色试浓度过高或孵育时间过长；
显色剂浓度过高或孵育时间过长。
【注意事项】
1、洗涤蛋白酶K时，一定要PBS冲洗3次，如果冲洗不净会严重干扰后续的标记反应；
2、3%的过氧化氢溶液孵育时间不应过长，否则会出现过氧化氢导致的DNA断裂，产生假阳性；
3、滴加TUNEL检测液时，可利用防蒸发膜防止其蒸发影响样本的生物素标记；配制好的DAB显色液必须一次性使用完毕，不宜冻存。
送检与交付标准
| 样品类型 | 样品需求 | 保存条件 | 运输条件 | 备注 |
|---|---|---|---|---|
| 新鲜组织 | 新鲜取材组织，用 PBS 清洗干净血液等，立即-80℃保存 | -80℃ | 干冰 | 所有样本均须有唯一标记，且标记清晰可识 |
| 一般固定组织 | 一般组织体积不超过2cmX2cmX0.5cm，固定时尽量保持组织的原有形态并清理干净血液及多余部分，如肠道内容物；固定液体积为组织大小的10倍以上，容器足够容纳组织不使其挤压变形。标注好固定液类型和固定时长 | 常温 | 常温 | |
| 特殊固定组织 | 睾丸、眼球、脊髓、肌肉等组织：推荐使用对应的特殊固定液进行固定，以保证固定效果。如Bouin液，适用于睾丸组织、皮肤组织及眼球的固定 | |||
| 组织蜡块 | 组织由标准的石蜡包埋盒包埋（尺寸为30*24*7mm），石蜡与组织要均匀接合，不能有裂痕；蜡块厚度根据所需切片的数量而定，有效厚度至少要超过 0.1cm。尽量提供半年内的组织蜡块，超过半年的蜡块抗原可能丢失，做免疫组化可能出现检测不到蛋白。 | 常温 | 常温 | |
| 组织切片 | 需用防脱载玻片进行捞片，并注明切片厚度、已烤片温度与时间，组织应在靠近切片下端 1/3 处。 | 4℃ | 冰袋 | |
| 细胞爬片 | 使用 12 孔板或 24 孔板专用细胞爬片，细胞爬片经固定后用 PBS 洗涤 2~3 次，保存在 PBS 中，用封口膜密封孔板。每个爬片在孔板盖上应有唯一的标记，并有电子版的分组信息，以防标记在运输途中模糊。 | 常温 | 常温 | |
| 植物样本 | 新鲜组织FAA固定，木质化程度不高；对于较薄的叶片，如果要求平行叶片切片，难以保证切完整；根茎要求直径>1mm | 常温 | 常温 | |
| 抗体 | 保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记，并附带说明书，抗体的量应大于实验所需的量。组织切片、组织芯片按稀释后 100μl 一张切片计算抗体用量， 24 孔板细胞爬片圆形盖玻片按稀释后 200μl 一张计算抗体用量，12 孔板细胞爬片圆形盖玻片按稀释后 400μl 一张计算抗体用量。 | -20℃ | 冰袋或干冰 |
电话：400-691-6686
在线时间：8:00-24:00
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