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GUS染色

GUS染色的实验目的是对植物样本进行染色,因为绝大多数植物细胞内不存在内源GUS活性,因此GUS基因广泛用作转基因植物的报告基因。

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送检与交付标准

【实验原理】

        GUSβ-glucuronidaseβ-D-葡萄糖苷酸酶)基因是目前常用的一种报告基因,其表达产物β-葡萄糖苷酸酶是一种水解酶,能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的水解,它可以将5--4--3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide,缩写为X-Gluc)分解为蓝色物质。

【实验方法】

  (1)组织化学染色定位方法

  (2)荧光法测定GUS活性

  (3)分光光度法测定GUS活性

【实验方法

  以某植物样本为例:

        step1: 90%丙酮固定20min;

        (丙酮(acetoue)涉透力很强,能使蛋白质沉流凝固,但不影响蛋白质的功能基团而保存鼻的活性,用于固定磷酸酶和氧化酶效果较好,因此可用于GUS染色前的固定,可防止GuS信号的扩散。铁点是固定快。渗透力强,易使组织细胞收缩。保持细胞结构欠佳。一般4C20分钟为直)

        Step2 : 1 mL GUS洗液洗去丙酮,洗2:

        Step3 : GUS染色液,冰上抽真空15-20 min;

        Step4 : 37C放置,隔一阵观察- -下,染上色了就进行下面步骤:

        Step5 : 吸出染色液,加入1mL 70%乙醇,停止染色反应及脱色:

        Step6 : 更换几次乙醇直到脱色完全;

        Step7 : 解剖镜及显微镜拍照观察

  载玻片上加适量HCG透明液,用镊子取出幼苗在透明液中铺平,盖上盖玻片,解剖镜观察整株,显微镜观察细节并拍照。

【交付标准】


1. 实验报告 

2. 真实实验结果

3. 原始图片

4. 实验原始数据

5. 剩余物料在周期内可返还(超过周期,不予返还)

【送检流程】