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成球实验

成球能力是肿瘤干细胞体外鉴定的一个重要方法,其判断的是单个细胞在合适的条件培养基自我更新的能力。

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实验介绍

【应用简介】

成球能力是肿瘤干细胞体外鉴定的一个重要方法,其判断的是单个细胞在合适的条件培养基自我更新的能力,一般用细胞球形成效率表示。对于某些肿瘤如胶质瘤和乳腺癌,它们的肿瘤干细胞在体外条件培养时相对较容易形成细胞球,而另一些上皮肿瘤如肝癌、结肠癌等则相对成球困难些。


【技术原理】

肿瘤干细胞能分化出不同表型,具有不断自我更新和分化能力,在添加了生长因子的无血清培养基中能培养形成细胞球。


【实验方法】

Step1:细胞培养;

Step2:细胞转染或药物处理;

Step3:将细胞接种于超低粘附培养板中,以成球培养基培养;

Step4:图片采集。

案例展示

成球实验_副本.jpg


处理组细胞成球较对照组小,说明该处理因素能抑制细胞成球。

技术总结

在细胞成球实验过程中需配制成球专用培养基,所用细胞培养板为超低黏附培养板。细胞接种密度需要自己摸索。低密度常用于原代肿瘤干细胞的提取,筛选可以非粘附生长的细胞。高密度用于细胞球的扩增,一般来说5000/ml以上。培养过程中无需换液,隔2-3天补液即可。

送检与交付标准

样品类型样品需求保存条件运输条件备注
冻存细胞

1.取对数生长期的细胞,消化离心收集细胞,加入冻存液吹打混匀,装入冻存管,标明细胞名称/细胞代数,冻存细胞数量在1-5*106个/ml。

2.项目启动后细胞复苏,复苏后3天反馈细胞状态,3-5天反馈细胞污染情况,5-7天反馈支原体污染情况。

3. 细胞详细信息(名称、培养基和其他培养条件等,如经过特别处理需告知并提供必要的信息)

液氮干冰所有样本均须有唯一标记,且标记清晰可识
复苏后细胞

1.使用T25培养瓶运输。细胞汇合度达到60%以上,装满培养液,只留纽扣大小的气泡,瓶口用封口膜封好,标明细胞名称/细胞代数/接种时间/培养基类型,瓶子固定运输。

2.收到细胞后3天反馈细胞状态,3-5天反馈细胞污染情况,5-7天反馈支原体污染情况。

3. 细胞详细信息(名称、培养基和其他培养条件等,如经过特别处理需告知并提供必要的信息)

常温常温
质粒

1.纯度高,无内毒素,无蛋白质,基因组DNA/RNA污染,质粒A260:A280的比值在1.8-2.0之间

2.浓度不低于0.5μg/μl,总量大于100μg,无内毒素处理

3. 载体详细信息,包括名称、大小、抗性、荧光标记

-20℃冰袋
病毒

1.慢病毒:滴度不低于1*108TU/ml,体积约200μl,标明制备时间,且没有反复冻融

2.腺病毒:滴度不低于1*109PFU/ml,体积约200μl,标明制备时间,且没有反复冻融

3.明确是否表达荧光标签蛋白及其种类,最好需要提供病毒载体图谱;

-80℃干冰


细胞交付标准.jpg