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核酸提取

核酸具有贮存和传递遗传信息等重要生物功能,是分子生物学研究的主要对象。采用常规吸附柱法抽提样本中的DNA、RNA,为下游实验提供高纯度和高浓度的模板。

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实验介绍

【技术原理】

核酸具有贮存和传递遗传信息等重要生物功能,是分子生物学研究的主要对象。采用常规吸附柱法抽提样本中的DNA、RNA,为下游实验提供高纯度和高浓度的模板。

DNA提取方法:对基因组DNA的提取方法主要有 CTAB,SDS和其他如玻璃珠法,酶法等。质粒DNA的提取主要有碱裂解法和煮沸法;线粒体,叶绿体DNA的提取主要有差速离心结合SDS法。

RNA提取方法:异硫氰酸胍/苯酚法。基本实验原理:细胞在变性异硫氰酸胍作用下裂解,核酸释放。DNA和RNA在特定pH下溶解度不同而分别于体系的中间相与水相,得以分离。进行有机溶剂抽提,沉淀,得到纯净RNA。


【实验流程】

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交付标准

常见问题

【常见问题】

1、洗脱产物DNA量很少或没有

   a、样品中细胞浓度低;

   b、样品裂解不充分;

   c、DNA吸附不充分。

 

2、DNA影响后续酶反应实验

   a、乙醇有残留;空离完成后再将吸附柱置室温或温箱2min左右,彻底去除乙醇。

 

3、核酸降解

   a、样本不新鲜(尤其对于RNA而言);

   b、前处理不当(样本量过大)。

送检与交付标准

样品类型样品需求保存条件运输条件备注
动物组织单个样品>0.1g,2mlEP管或冻存管装,不要过量;样本应尽量新鲜,如不能立即提取蛋白或核酸,应液氮速冻后冻存于-80℃或更低,冻存样本避免反复冻融以致降解-80℃干冰所有样本均须有唯一标记,且标记清晰可识
种子样本去壳新鲜或保存于液氮中的的种子样本,单个样品>0.2g。-80℃干冰
贴壁/悬浮细胞

1. 总RNA或蛋白:106cell/指标、浆/核RNA或蛋白:107cell/指标、线粒体RNA或蛋白:2*107     cell/指标,样本尽量新鲜,细胞收取后直接加Trizol(QPCR检测)或直接冻存于-80℃       

2. 若细胞处理(加药、转染、感染)后状态差应酌情加大收样量

-80℃干冰
全血/血清样品用抗凝管保存的外周血 5~10ml,骨髓 1~3ml; -80℃保存不超半周的白细胞匀浆>400μl,每 400μl 加入 400μl Trizol。-80℃干冰
石蜡包埋样品由标准的石蜡包埋盒包埋的石蜡块,有效厚度大于 0.1cm; 新鲜的 FFPE 组织切片,每片厚度不超过 10μm,2~8 张,表面积不超过 250mm2。-20℃冰袋
抗体

1. 按样本种属提供满足相应实验要求的抗体;

2. 按抗体说明书要求寄送,尽量避免分装;如分装,确保量足够进行实验,并提供抗体说明书。

3.保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记,抗体的量应大于实验所需的量。

-20℃冰袋
引物干粉,≥1OD,如进行预实验,每个基因至少提供两对引物, 附带公司引物合成单。-20℃冰袋或常温




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