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实验介绍
【技术原理】
利用不同荧光物质标记的单克隆抗体,与待测成分作用,然后上流式细胞仪检测待测细胞。待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列,一个个迅速通过激光聚焦区,激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物发出的信号,利用这些信号,可计算出相对含量,从而得到各细胞群的相对比值。
我们常用的检测指标为
间充质干细胞(MSCs): 表达CD73\CD90\CD105\CD44,不表达CD45\CD34\CD14\CD11b\CD19\HIL-DR
肿瘤干细胞(CDCs):CD24\CD44\CD133\CD271\CD304\CD326
【实验流程】
Step1:制成单细胞悬液(组织样本)
Step2:溶血(细胞样本无需进行此步骤)
Step3:离心去上清
Step4:调整细胞密度
Step5:加入相应的标记抗体
Step6:孵育
Step7:洗涤后离心去上清
Step8:上机检测
注意事项
国际细胞治疗协会间充质和组织干细胞委员会2006年提出了MSC鉴定的最低标准,关于细胞表型的要求是表达CD90, CD105和CD73,不表达CD45, CD34, CD14或CD11b, CD79a或CD19和HLA-DR;阳性指标都需要染色,阴性指标一般选择2-3个指标,因为是做细胞表型鉴定,所以要配齐同型对照。为保证所得结果的可靠性,每次实验前应用标准荧光微球检测仪器的变异系数。每次应做阴性对照、阳性对照、质控对照、以确保将各种试剂及操作过程对结果的影响降至最低。
送检与交付标准
样品类型 | 样品需求 | 运输条件 |
---|---|---|
组织 | 离体后组织制成单细胞悬液,加入PBS培养基内 | 常温运输 |
活细胞 | 样本量:1*106个细胞/TEST,加入PBS培养基内 | 常温运输 |
血液 | 将血液采集在EDTA肝素钠的抗凝采血管内 | 常温运输 |