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原代及干细胞鉴定

原代及干细胞鉴定可通过流式细胞术对细胞特异性表面标记进行分析、坚定。

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实验介绍

【技术原理】

       利用不同荧光物质标记的单克隆抗体,与待测成分作用,然后上流式细胞仪检测待测细胞。待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列,一个个迅速通过激光聚焦区,激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物发出的信号,利用这些信号,可计算出相对含量,从而得到各细胞群的相对比值。

我们常用的检测指标为

间充质干细胞(MSCs): 表达CD73\CD90\CD105\CD44,不表达CD45\CD34\CD14\CD11b\CD19\HIL-DR 

肿瘤干细胞(CDCs):CD24\CD44\CD133\CD271\CD304\CD326 


【实验流程】

Step1:制成单细胞悬液(组织样本)

Step2:溶血(细胞样本无需进行此步骤)

Step3:离心去上清

Step4:调整细胞密度

Step5:加入相应的标记抗体

Step6:孵育

Step7:洗涤后离心去上清

Step8:上机检测

注意事项

国际细胞治疗协会间充质和组织干细胞委员会2006年提出了MSC鉴定的最低标准,关于细胞表型的要求是表达CD90, CD105和CD73,不表达CD45, CD34, CD14或CD11b, CD79a或CD19和HLA-DR;阳性指标都需要染色,阴性指标一般选择2-3个指标,因为是做细胞表型鉴定,所以要配齐同型对照。为保证所得结果的可靠性,每次实验前应用标准荧光微球检测仪器的变异系数。每次应做阴性对照、阳性对照、质控对照、以确保将各种试剂及操作过程对结果的影响降至最低。

送检与交付标准

样品类型样品需求运输条件
组织离体后组织制成单细胞悬液,加入PBS培养基内常温运输
活细胞样本量:1*106个细胞/TEST,加入PBS培养基内常温运输
血液将血液采集在EDTA肝素钠的抗凝采血管内常温运输



流式交付标准.jpg