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细胞衰老

衰老细胞中细胞器数量尤其是线粒体数量减少,胞质内有色素堆积和空泡形成,最终导致细胞死亡。总体来说衰老细胞的各种结构呈退行性变化。根据其特征,目前常用β-半乳糖苷酶活性检测衰老。

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2024-05-18 20:00:04

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实验介绍

【应用简介】

衰老细胞的形态变化主要表现为形状变大、变平、胞核增大、核膜内陷、染色质固缩、胞内溶酶体变多等。衰老细胞中细胞器数量尤其是线粒体数量减少,胞质内有色素堆积和空泡形成,最终导致细胞死亡。总体来说衰老细胞的各种结构呈退行性变化。根据其特征,目前常用β-半乳糖苷酶活性检测衰老。


【技术原理】

衰老细胞或组织产生的β-半乳糖苷酶可以催化底物X—Gal,生成深蓝色产物,从而在光学显微镜下很容易观察到。在人体表皮角质层细胞中,也可以发现SA-β-gal随年龄的增加而增加。并且,SA-β-gal不依赖于DNA复制,可以区分衰老细胞与静止期的细胞。


【实验方法】

Step1:细胞培养

Step2:细胞转染或药物处理

Step3:处理结束后进行细胞β-半乳糖苷酶检测

Step4:200x镜下观察

案例展示

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经过处理后,细胞衰老程度显著增加。

技术总结

细胞在体外培养时,会随着传代次数的增加,衰老情况随之增加,表现为衰老细胞增多或细胞更容易衰老。因此,在细胞传至20代左右时,可取一部分细胞进行β-半乳糖苷酶染色分析,发现阳性结果即诱导成功。如染色不理想,则可增加外部因素处理,如不同浓度的双氧水,处理时间可自己选择,但不宜过长。外部因素处理后,可从中选取部分细胞进行染色分析。或者,在细胞铺板培养过程中,提高细胞的接种密度,同时使用无血清的培养基进行培养,一样选择部分细胞进行染色分析。以上操作可交替进行。直至出现染色阳性结果。

送检与交付标准

样品类型样品需求保存条件运输条件备注
冻存细胞

1.取对数生长期的细胞,消化离心收集细胞,加入冻存液吹打混匀,装入冻存管,标明细胞名称/细胞代数,冻存细胞数量在1-5*106个/ml。

2.项目启动后细胞复苏,复苏后3天反馈细胞状态,3-5天反馈细胞污染情况,5-7天反馈支原体污染情况。

3. 细胞详细信息(名称、培养基和其他培养条件等,如经过特别处理需告知并提供必要的信息)

液氮干冰所有样本均须有唯一标记,且标记清晰可识
复苏后细胞

1.使用T25培养瓶运输。细胞汇合度达到60%以上,装满培养液,只留纽扣大小的气泡,瓶口用封口膜封好,标明细胞名称/细胞代数/接种时间/培养基类型,瓶子固定运输。

2.收到细胞后3天反馈细胞状态,3-5天反馈细胞污染情况,5-7天反馈支原体污染情况。

3. 细胞详细信息(名称、培养基和其他培养条件等,如经过特别处理需告知并提供必要的信息)

常温常温
质粒

1.纯度高,无内毒素,无蛋白质,基因组DNA/RNA污染,质粒A260:A280的比值在1.8-2.0之间

2.浓度不低于0.5μg/μl,总量大于100μg,无内毒素处理

3. 载体详细信息,包括名称、大小、抗性、荧光标记

-20℃冰袋
病毒

1.慢病毒:滴度不低于1*108TU/ml,体积约200μl,标明制备时间,且没有反复冻融

2.腺病毒:滴度不低于1*109PFU/ml,体积约200μl,标明制备时间,且没有反复冻融

3.明确是否表达荧光标签蛋白及其种类,最好需要提供病毒载体图谱;

-80℃干冰




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