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细胞周期检测

体外培养细胞 生长、分裂繁殖的能力,可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系,如随着分裂指数的不断提高,细胞也就进入了指数生长期。分裂指数指细胞 群体中分裂细胞 所占的百分比,它是测定细胞 周期的一个重要指标,也是不同实验研究选择细胞的重要依据。

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实验介绍

【技术原理】

流式利用不同荧光物质标记的单克隆抗体,与待测成分作用,然后上流式细胞仪检测待测细胞。待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列,一个个迅速通过激光聚焦区,激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物发出的信号,利用这些信号,可计算出相对含量,从而得到细胞群的相对比值。

细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期,停止细胞分裂,执行一定生物学功能(G0期)。由于细胞周期各时相的DNA含量不同,通常正常细胞的G1/ G0期具有二倍体细胞的DNA含量(2N),而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。PI可以与DNA结合,其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此,通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期,S期和G2/M期。  


【实验方法】

Step1:细胞培养 

Step2:转染或药物处理 

Step3:细胞收集

Step4:加周期试剂 

Step5:上机检测

案例展示


在施加药物后,细胞周期明显阻滞。 

技术总结

1、考虑到进行流式时需要用到对照组细胞设置空白组(用于调节电压)和单染组细胞(用于调节补偿),因此要求该组细胞量较其他组多;

2、如发现细胞密度偏低,细胞量较少,则适当增加离心时间。收集细胞时,应该连同上清一起收集,同时胰酶消化时间不宜过长,否则容易引起假阳性;

3、检测细胞经过转染等处理后可能会带有自发荧光,应注意选择凋亡试剂盒的颜色通道 如:带绿色荧光时,应选择7AAD试剂盒;

4、细胞铺板应选择细胞状态良好的时候进行,且避免因反复吹打形成机械损伤,而出现细胞碎片过多。

送检与交付标准

样品类型样品需求运输条件
组织离体后组织制成单细胞悬液,加入PBS培养基内常温运输
活细胞样本量:1*106个细胞/TEST,加入PBS培养基内常温运输
血液将血液采集在EDTA肝素钠的抗凝采血管内常温运输



流式交付标准.jpg