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肝纤维化模型

肝纤维化是多种慢性肝病发展至肝硬化的共同病理学基础,虽然对肝纤维化的研究已从细胞水平进入分子水平,但肝纤维化动物模型的建立,仍是临床研究和实验研究的重点和难点。肝纤维化动物模型的建立,既可以深入全面地研究肝纤维化发病机制,又可以为临床筛选防治肝纤维化药物提供基础研究。

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实验介绍

【应用简介】

肝纤维化是多种慢性肝病发展至肝硬化的共同病理学基础,虽然对肝纤维化的研究已从细胞水平进入分子水平,但肝纤维化动物模型的建立,仍是临床研究和实验研究的重点和难点。肝纤维化动物模型的建立,既可以深入全面地研究肝纤维化发病机制,又可以为临床筛选防治肝纤维化药物提供基础研究。


【肝纤维化模型构建】

目前肝纤维化动物模型可分为基因相关模型与非基因模型,前者主要是指工程动物模型,非基因模型主要指在相同或相似的遗传背景下,通过环境因素,药物/毒物或其它因素诱导得到的肝纤维化模型。

肝纤维化常用模型有化学试剂诱导法(四氯化碳诱导,硫代乙酰胺诱导),胆管阻塞法(胆管结扎或寄生虫),乙醇诱导法以及免疫法。



【实验方法】

一、化学试剂诱导法

致病机理:

四氯化碳在肝细胞内经CYP2E1代谢产生的自由基可以损伤细胞膜,从而破坏肝细胞的结构和功能,造成肝细胞坏死。同时,肝脏内的星型细胞会活化,释放Ⅳ型胶原酶,降解ⅳ型胶原,合成分泌ⅰ型胶原,而引起胶原沉积和肝纤维化。

动物准备:

雄性的BALB / c小鼠10周龄(BALB / C比C57敏感,造模成功率更高)或SD大鼠(雄性200克左右)等,橄榄油,四氯化碳,注射器,电子天平。

实验步骤:

1、配制四氯化碳溶液,四氯化碳与橄榄油按照体积比1:4混匀,备用;

2、按小鼠体重0.5μl/ g CCl4(2.5μlCCl4橄榄油溶液)腹腔注射,每周2次,持续6周。空白对照组仅注射橄榄油2.5μl/ g;

3、在连续给CCl4 2周后,可随机抽取对照组和造模组小鼠各3只,检测ALT,AST,TBL以及切片等是否造模成功;

如图4所示,若模型成功,即可进行药物评价,继续处理4周后,即可处死小鼠,检测肝纤维化相关的标记,评价药物效果。


二、胆管结扎致肝纤维化

致病机理:

通过手术结扎胆总管的方法,模拟临床上由于胆汁淤塞引起的肝疾病。

动物准备:

雄性C57,只BALB / c小鼠(10周龄左右)或雄性SD大鼠(200克左右)器械:扩创钩,镊子,尖头剪刀,持针钳,圆针,角针,钝性剪刀,刀柄,创巾,棉签,剃毛刀,酒精棉球,碘伏,注射器,缝合线(3号)。

实验步骤:

1、术前麻醉,固定;

2、术部剃毛,擦碘伏,75%酒精脱碘,铺创巾;

3、沿腹中线剪开皮肤,钝性剪刀分离皮下的脂肪和肌肉;

4、皮肤上开到尖状软骨处,拉牵引线,生理盐水冲洗腹腔,扩创钩使皮肤两侧撑开;

5、棉签沾生理盐水拨开肝脏,肠,胰等脏器,在肝脏底部寻找并暴露出胆管(大鼠没有胆囊,在肝脏和十二指肠中间找,小鼠沿着胆囊和十二指肠找)胆管下可看到门静脉血管,与门静脉血管平行的透明黄色的为胆管如下图所示:

6、用镊子拨开胆管覆盖及周边的脂肪(一定要剥离干净周边的脂肪,否则容易造成结扎线滑脱),找到后把镊子伸到胆管下方拨开脂肪,丝线穿过镊子,在胆管处打结,可扎2道防止造模不成功,生理盐水冲洗腹腔;

7、将内脏归位,先把腹膜缝在一起,然后再将皮肤缝合;

8、每天碘伏消毒,75%酒精亦可;

9、对照组与结扎组操作一致,仅不扎线。

图片介绍


【实验流程图】

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【优秀案例图】


肺纤维化 100X_副本_副本.jpg


技术总结

【常见问题】

1、滴注博来霉素后短时间内小鼠死亡

答:可能原因如下,a、药物浓度偏高;b、滴注体积过大;c、麻醉过量致死;d、气管缝合时有血液渗入导致小鼠死亡。


【注意事项】

1、滴注后应将小鼠头部抬起,使药物缓缓渗入气管、支气管;

2、选择合适周龄的小鼠进行试验。

送检与交付标准

【交付标准】

固定组织、实验报告


【送检流程】

动物及药物代采购