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免疫表型

免疫表型分析可以作为鉴别各种白血病和淋巴瘤的实验手段,辅助临床评估疗效和预后。不是所有的细胞都能通过免疫表型来判定,只有有特异表型标志的细胞才能通过表型来判断。

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实验介绍

【应用简介】

免疫表型分析可以作为鉴别各种白血病和淋巴瘤的实验手段,辅助临床评估疗效和预后。不是所有的细胞都能通过免疫表型来判定,只有有特异表型标志的细胞才能通过表型来判断。


【免疫表型】

免疫表型是通常所说的白细胞分化标志,即CD加上数字,现在已经发现300多种白细胞分化标志。因为细胞不同,所以每个细胞的标志也会不同,就像不同的人有不同的面孔一样。不同的免疫细胞表面有大量的抗原,可以作为不同分化阶段免疫细胞的表面标志物。

淋巴细胞亚群分析是检测细胞免疫和体液免疫功能的重要指标,它总体反应机体当前的免疫免疫功能、状态和平衡水平,并可以辅助诊断某些疾病,如自身免疫病、免疫缺陷病、恶性肿瘤、血液病、变态反应性疾病等,分析发病机制,观察疗效及检测预后有重要意义。


【实验方法】

1、取20ul单克隆抗体与100μl抗凝血,共同混合置室温20 min;

2、加溶血素1500μI,置室温避光15 min,2500 r/min离心5 min;

3、弃上清,加1500μI PBS,混匀,2500 r/min离心5 min;

4、同上操作1次,上仪器检测:以CD45-PerCP/SSC设门,观察每群细胞免疫表型。

案例展示


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图 1. 淋巴细胞亚群的免疫表型

技术总结

1、标本最好用EDTA抗凝,其次用肝素;

2、标本要新鲜采集,不能发生凝血;

3、制备细胞悬液时,使用标准溶血剂以使红细胞充分溶解;

4、标记后的细胞应尽快上机检测,最迟不能超过72h。

送检与交付标准

样品类型样品需求保存条件运输条件备注
冻存细胞

1.取对数生长期的细胞,消化离心收集细胞,加入冻存液吹打混匀,装入冻存管,标明细胞名称/细胞代数,冻存细胞数量在1-5*106个/ml。

2.项目启动后细胞复苏,复苏后3天反馈细胞状态,3-5天反馈细胞污染情况,5-7天反馈支原体污染情况。

3. 细胞详细信息(名称、培养基和其他培养条件等,如经过特别处理需告知并提供必要的信息)

液氮干冰所有样本均须有唯一标记,且标记清晰可识
复苏后细胞

1.使用T25培养瓶运输。细胞汇合度达到60%以上,装满培养液,只留纽扣大小的气泡,瓶口用封口膜封好,标明细胞名称/细胞代数/接种时间/培养基类型,瓶子固定运输。

2.收到细胞后3天反馈细胞状态,3-5天反馈细胞污染情况,5-7天反馈支原体污染情况。

3. 细胞详细信息(名称、培养基和其他培养条件等,如经过特别处理需告知并提供必要的信息)

常温常温
质粒

1.纯度高,无内毒素,无蛋白质,基因组DNA/RNA污染,质粒A260:A280的比值在1.8-2.0之间

2.浓度不低于0.5μg/μl,总量大于100μg,无内毒素处理

3. 载体详细信息,包括名称、大小、抗性、荧光标记

-20℃冰袋
病毒

1.慢病毒:滴度不低于1*108TU/ml,体积约200μl,标明制备时间,且没有反复冻融

2.腺病毒:滴度不低于1*109PFU/ml,体积约200μl,标明制备时间,且没有反复冻融

3.明确是否表达荧光标签蛋白及其种类,最好需要提供病毒载体图谱;

-80℃干冰




细胞交付标准.jpg