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2024-10-14 00:25:26
实验介绍
【应用简介】
免疫表型分析可以作为鉴别各种白血病和淋巴瘤的实验手段，辅助临床评估疗效和预后。不是所有的细胞都能通过免疫表型来判定，只有有特异表型标志的细胞才能通过表型来判断。
【免疫表型】
免疫表型是通常所说的白细胞分化标志，即CD加上数字，现在已经发现300多种白细胞分化标志。因为细胞不同，所以每个细胞的标志也会不同，就像不同的人有不同的面孔一样。不同的免疫细胞表面有大量的抗原，可以作为不同分化阶段免疫细胞的表面标志物。
淋巴细胞亚群分析是检测细胞免疫和体液免疫功能的重要指标，它总体反应机体当前的免疫免疫功能、状态和平衡水平，并可以辅助诊断某些疾病，如自身免疫病、免疫缺陷病、恶性肿瘤、血液病、变态反应性疾病等，分析发病机制，观察疗效及检测预后有重要意义。
【实验方法】
1、取20ul单克隆抗体与100μl抗凝血，共同混合置室温20 min；
2、加溶血素1500μI，置室温避光15 min，2500 r/min离心5 min；
3、弃上清，加1500μI PBS，混匀，2500 r/min离心5 min；
4、同上操作1次，上仪器检测：以CD45-PerCP/SSC设门，观察每群细胞免疫表型。
案例展示
图 1. 淋巴细胞亚群的免疫表型
技术总结
1、标本最好用EDTA抗凝，其次用肝素；
2、标本要新鲜采集，不能发生凝血；
3、制备细胞悬液时，使用标准溶血剂以使红细胞充分溶解；
4、标记后的细胞应尽快上机检测，最迟不能超过72h。
送检与交付标准
| 样品类型 | 样品需求 | 保存条件 | 运输条件 | 备注 |
|---|---|---|---|---|
| 冻存细胞 | 1.取对数生长期的细胞，消化离心收集细胞，加入冻存液吹打混匀，装入冻存管，标明细胞名称/细胞代数，冻存细胞数量在1-5*106个/ml。 2.项目启动后细胞复苏，复苏后3天反馈细胞状态，3-5天反馈细胞污染情况，5-7天反馈支原体污染情况。 3. 细胞详细信息（名称、培养基和其他培养条件等，如经过特别处理需告知并提供必要的信息） | 液氮 | 干冰 | 所有样本均须有唯一标记，且标记清晰可识 |
| 复苏后细胞 | 1.使用T25培养瓶运输。细胞汇合度达到60%以上，装满培养液，只留纽扣大小的气泡，瓶口用封口膜封好，标明细胞名称/细胞代数/接种时间/培养基类型，瓶子固定运输。 2.收到细胞后3天反馈细胞状态，3-5天反馈细胞污染情况，5-7天反馈支原体污染情况。 3. 细胞详细信息（名称、培养基和其他培养条件等，如经过特别处理需告知并提供必要的信息） | 常温 | 常温 | |
| 质粒 | 1.纯度高，无内毒素，无蛋白质，基因组DNA/RNA污染，质粒A260:A280的比值在1.8-2.0之间 2.浓度不低于0.5μg/μl，总量大于100μg，无内毒素处理 3. 载体详细信息，包括名称、大小、抗性、荧光标记 | -20℃ | 冰袋 | |
| 病毒 | 1.慢病毒：滴度不低于1*108TU/ml，体积约200μl，标明制备时间，且没有反复冻融 2.腺病毒：滴度不低于1*109PFU/ml，体积约200μl，标明制备时间，且没有反复冻融 3.明确是否表达荧光标签蛋白及其种类，最好需要提供病毒载体图谱； | -80℃ | 干冰 |
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