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EDU检测细胞增殖

EDU细胞增殖检测可以直接并准确地检测出新DNA的合成。这种检测不仅能够测定单个细胞的增殖,还可以通过任何平台检测出细胞、组织或整个有机体中的增殖细胞。

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实验介绍

【实验原理

EDU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子,通过基于EDUApollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性,通过检测EDU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。EDU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EDU检测染料在细胞内很容易扩散,无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)即可有效检测,可有效避免样品损伤,在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。

图片1.png图片2.png



【实验方法】

Step1: 细胞预处理:按实验设置准备处理细胞


Step2: EDU标记:将EDU工作液与培养基1:1混合,加入待检样品中,置于37℃饱和湿度、含5% 二氧化碳的培养箱中培养一段时间。


Step3: 细胞固定:EDU标记完成后,用4%的多聚甲醛室温固定15-20min


Step4: 细胞通透:细胞固定完成后,用0.3%的TritonX-100室温通透10-15min


Step5: EDU检测:Click反应液室温避光孵育至镜下看到荧光。


Step6: Hoechst33442染色:室温避光孵育10min


Step7: 果分析:图像获取及结果分析


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案例展示

图片4.png

1EDU检测镜下荧光图


结果分析:


1.  细胞状态良好,镜下染色颜色清晰,无非特异性着色。


2. EDU标记(即绿色荧光细胞葛素)随处理不同有多少的差异。

技术总结

【常见问题与注意事项】


1EDU的浓度与孵育时间有关,短时间(小于4h)宜采用高浓度(20-50μM),长时间(大于24h)宜采用低浓度(1-10μM


2EDU孵育时间取决于细胞周期,一般为细胞周期的1/101/5,但大多数细胞系均可采用4h-6h孵育时间。


3EDU反应液应现配现用,孵育时间一般约为室温30min-2h


4、贴壁细胞宜采用荧光检测方式,适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜、高内涵筛选仪检测。悬浮细胞可用涂片方式荧光检测,亦可采用流式细胞仪分析,流式细胞仪需要具备相应荧光通道


5、染色完成后立即进行检测;如果条件限制,请避光4℃湿润保存待测,但不应超过3天,若为细胞爬片或涂片,可使用抗荧光淬灭封片后4保存及进行检测。


交付标准

1. 实验报告 

2. 真实实验结果

3. 原始图片

4. 实验原始数据

5. 剩余物料在周期内可返还(超过周期,不予返还)