ELISA酶联免疫吸附实验操作过程中的常见问题的处理方法由普拉特泽生物给大家解答与分享，普拉特泽生物表达检测平台可承接各种表达检测外包服务，包括检测ELISA、Western Blot、DNA甲基化等实验外包服务，本文是我们在完成几千例ELISA实验后，根据实验员操作过程中的常见问题与大家留言咨询最多的问题进行回答与建议，快来学习吧！

   问题一：ELISA试验出现非常弱的结果，其可能原因和处理的方法如下：

   可能原因1：温育的时间或者温度不够;

   解决方法：校正温育箱温度。

   可能原因2：显色反应时间太短;

   解决方法：校正定时钟准确定时。

   可能原因3：所用配制缓冲液的蒸馏水有问题:

   解决方法：使用新鲜合格的蒸馏水。

   可能原因4：加入抗体/酶的稀释液浓度太低:

   解决方法：按照说明书保存试剂盒和准确配制工作液。校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密。

   可能原因5：酶标仪滤光片不正确:

   解决方法：检查酶标仪使用的滤光片。

   可能原因6：试剂盒没有充分平衡;

   解决方法：试剂室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温。

   可能原因7：不正确的试剂储存方式:

   解决方法：按照说明书要求保存试剂盒。

   问题二：ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，原因和处理方法如下：

   可能原因1：加样本及试剂量不准;孔间不一致

   解决方法：校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密；重复某一样品时，加样时间尽可能与第一次接近；重复测定标本，操作条件，人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性；样品稀释前应充分混匀。

   可能原因2：加样过快，孔间发生污染;

   解决方法：重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性;加样不要过快。

   可能原因3：加错样本;

   解决方法：检查记录和试剂，是否加错样本。

   可能原因4：加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区

   解决方法：加样枪头不要贴壁。

   可能原因5：不同批号试剂盒中组分混用;

   解决方法:：不同批号试剂盒中组分不可混用。

   可能原因6：温育时间、洗板、显色时间不一致

   解决方法:检查时间是否一致。

   问题三：ELISA试验结果白板，而且阳性对照不显色，怎么办?

   可能原因1：漏加或者误加试剂;

   解决方法:：检查试验记录和剩余试剂。每次加液前均应核对标签。

   可能原因2：洗板液配制中出现问题，如量筒不干净含HRP酶抑制物(叠氨钠等)

   解决方法：使用干净的器皿，正确配制试剂。

   可能原因3：温育的时间或温度不够;

   解决方法:：校正温育箱温度。:

   可能原因4：标准品失活或者丢失;

   解决方法：标准品正确保存、溶解和混匀。

   可能原因5：抗体失活或者丢失;

   解决方法:：更换抗体或者提高抗体浓度

   可能原因6：酶失活或者丢失

   检查方法：把工作浓度的酶再稀释20-100倍，取5uL加入50ul的显色底物，终止后显色是否能达到10左右，此为酶的粗略估计。

   解决方法：更换酶或者提高酶的浓度。

   问题四：ELISA试验结果空白背景高，怎么处理？

   可能原因1：洗板不干净;

   解决方法：充分洗涤，彻底拍干:洗板要防止交叉污染:浓缩洗液准确配制;吸嘴尽可能一次性使用;加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染。

   可能原因2：显色液变质或者试剂过期;

   解决方法：检查试剂盒有效期。

   可能原因3：ELISA检测试剂稀释有误，如加酶的浓度过高:

   解决方法：请按说明书所示稀释倍数配制:

   可能原因4：蒸馏水受酶等污染;

   解决方法:：使用新鲜蒸馏水;

   可能原因5：试剂混用;

   解决方法:：不同批号试剂勿混用。

   可能原因6：培养箱温度超过37℃或反应时间过长。

   解决方法:：显色反应时间适当缩短。
   好啦，那关于ELISA实验的全部介绍我们就彻底讲完啦，大家要记得温故而知新哦，关于ELISA实验的简介、步骤、注意事项、常见问题链接奉上~快去学习吧！

ELISA酶联免疫吸附实验——简介
ELISA酶联免疫吸附——实验步骤
ELISA酶联免疫吸附——注意事项
ELISA酶联免疫吸附——常见问题

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