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HE染色

苏木精-伊红染色法简称HE染色法,是最常用的染色方法。

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实验介绍

【技术原理】

苏木精-伊红染色法简称HE染色法,是最常用的染色方法。苏木精(hematoxylin)是阳离子染料,能够将细胞核内的嗜碱性物质染成蓝紫色。伊红(eosin)是阴离子染料,能够将细胞质和胶原纤维等染成粉红色。


【实验流程】

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案例展示

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常见问题

1、染色易脱片

     组织本身破碎或过硬等,用防脱载玻片解决;

     脱水、透明不足,重新脱水透明浸蜡;

     脱水、透明过度,用酒精甘油各半浸泡切面后再切片。

     切片过厚,厚薄均匀切片。


2、切片染色不均

    取材固定不当,取材规范标准,固定彻底;

    脱水不够,重新脱水、透明、浸蜡。


3、切片染色模糊不清

   包埋蜡温度过高;

   分化过度;

   脱水透明不彻底。

送检与交付标准

样品类型样品需求保存条件运输条件备注
新鲜组织新鲜取材组织,用 PBS 清洗干净血液等,立即-80℃保存-80℃干冰所有样本均须有唯一标记,且标记清晰可识
一般固定组织一般组织体积不超过2cmX2cmX0.5cm,固定时尽量保持组织的原有形态并清理干净血液及多余部分,如肠道内容物;固定液体积为组织大小的10倍以上,容器足够容纳组织不使其挤压变形。标注好固定液类型和固定时长常温常温
特殊固定组织睾丸、眼球、脊髓、肌肉等组织:推荐使用对应的特殊固定液进行固定,以保证固定效果。如Bouin液,适用于睾丸组织、皮肤组织及眼球的固定

组织蜡块组织由标准的石蜡包埋盒包埋(尺寸为30*24*7mm),石蜡与组织要均匀接合,不能有裂痕;蜡块厚度根据所需切片的数量而定,有效厚度至少要超过 0.1cm。尽量提供半年内的组织蜡块,超过半年的蜡块抗原可能丢失,做免疫组化可能出现检测不到蛋白。常温常温
组织切片需用防脱载玻片进行捞片,并注明切片厚度、已烤片温度与时间,组织应在靠近切片下端 1/3 处。4℃冰袋
细胞爬片使用 12 孔板或 24 孔板专用细胞爬片,细胞爬片经固定后用 PBS 洗涤 2~3 次,保存在 PBS 中,用封口膜密封孔板。每个爬片在孔板盖上应有唯一的标记,并有电子版的分组信息,以防标记在运输途中模糊。常温常温
植物样本新鲜组织FAA固定,木质化程度不高;对于较薄的叶片,如果要求平行叶片切片,难以保证切完整;根茎要求直径>1mm常温常温
抗体保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记,并附带说明书,抗体的量应大于实验所需的量。组织切片、组织芯片按稀释后 100μl 一张切片计算抗体用量, 24 孔板细胞爬片圆形盖玻片按稀释后 200μl 一张计算抗体用量,12 孔板细胞爬片圆形盖玻片按稀释后 400μl 一张计算抗体用量。-20℃冰袋或干冰



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