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T/B/NK淋巴细胞亚群检测

流式利用不同荧光物质标记的单克隆抗体,与待测成分作用,然后上流式细胞仪检测待测细胞。待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列,一个个迅速通过激光聚焦区,激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物发出的信号,利用这些信号,可计算出相对含量,从而得到细胞群的相对比值。

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实验介绍

【技术原理】

       流式利用不同荧光物质标记的单克隆抗体,与待测成分作用,然后上流式细胞仪检测待测细胞。待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列,一个个迅速通过激光聚焦区,激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物发出的信号,利用这些信号,可计算出相对含量,从而得到细胞群的相对比值。

利用不同荧光物质标记的抗CD3、CD4、CD8、CD19、CD16、CD56单克隆抗体,与待测成分作用,然后上流式细胞仪检测待测细胞。待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列,一个个迅速通过激光聚焦区,激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物发出的信号,利用这些信号,可计算出CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD16+、CD56+的相对含量,从而得到各细胞群的相对比值技术。

淋巴细胞是正常机体免疫系统功能最重要的一大细胞群,在免疫应答过程中,淋巴细胞发育成为功能不同的亚群。各亚群的数量和功能产生异常时,就能导致机体免疫紊乱并产生病理变化。淋巴细胞亚群分析是检测细胞免疫和体液免疫功能的重要指标,它总体反映机体当前的免疫功能、状态和平衡水平,并可以辅助诊断某些疾病(如自身免疫病、免疫缺陷病、恶性肿瘤、血液病、变态反应性疾病等),分析发病机制,观察疗效及检测预后有重要意义。利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原结合,再配合多色荧光染料,通过流式细胞仪检测分析即可以把各种不同功能的淋巴亚群区分开来,进而得到各亚群的相对比例。

我们的常用检测指标为

T淋巴细胞:CD3+CD4+CD8+

B淋巴细胞:CD3-CD19+

NK细胞:CD3-CD16+CD56


【实验流程】

Step1:制成单细胞悬液(组织样本)

Step2:溶血(细胞样本无需进行此步骤)

Step3:离心去上清

Step4:调整细胞密度

Step5:加入相应的标记抗体

Step6:孵育

Step7:洗涤后离心去上清

Step8:上机检测

案例展示


淋巴细胞亚群_副本.png




注意事项

1、新鲜全血应尽快送检,长时间保存应放置在4-8℃;

2、使用抗凝管采集,一般采血管为EDTA与肝素抗凝管;

3、抗凝血应保证无血块凝集。

送检与交付标准

样品类型样品需求运输条件
组织离体后组织制成单细胞悬液,加入PBS培养基内常温运输
活细胞样本量:1*106个细胞/TEST,加入PBS培养基内常温运输
血液将血液采集在EDTA肝素钠的抗凝采血管内常温运输



流式交付标准.jpg