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基因调取

原核生物的基因是连续不间隔的,直接用限制酶从DNA切取就可得到目的基因,再PCR扩增后就能得到大量目的基因。 真核细胞核基因组DNA编码的基因,以及感染真核细胞的DNA病毒和反转录病毒基因组编码基因,统称真核基因。真核基因调取是指通以动物组织或细胞为模板,提取获得cDNA或gDNA,从中扩增基因或启动子等功能元件。也可将基因片段或者各功能元件片段亚克隆至各载体。

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实验介绍


【技术原理】

原核生物的基因是连续不间隔的,直接用限制酶从DNA切取就可得到目的基因,再PCR扩增后就能得到大量目的基因。

真核细胞核基因组DNA编码的基因,以及感染真核细胞的DNA病毒和反转录病毒基因组编码基因,统称真核基因。真核基因调取是指通以动物组织或细胞为模板,提取获得cDNA或gDNA,从中扩增基因或启动子等功能元件。也可将基因片段或者各功能元件片段亚克隆至各载体。


【原核流程】

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【真核流程】

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案例展示

                                                           基因调取_副本.jpg


临床组织样本的目的基因调取

送检与交付标准

样品类型样品需求保存条件运输条件备注
动物组织单个样品>0.1g,2mlEP管或冻存管装,不要过量;样本应尽量新鲜,如不能立即提取蛋白或核酸,应液氮速冻后冻存于-80℃或更低,冻存样本避免反复冻融以致降解-80℃干冰所有样本均须有唯一标记,且标记清晰可识
种子样本去壳新鲜或保存于液氮中的的种子样本,单个样品>0.2g。-80℃干冰
贴壁/悬浮细胞

1. 总RNA或蛋白:106cell/指标、浆/核RNA或蛋白:107cell/指标、线粒体RNA或蛋白:2*107     cell/指标,样本尽量新鲜,细胞收取后直接加Trizol(QPCR检测)或直接冻存于-80℃       

2. 若细胞处理(加药、转染、感染)后状态差应酌情加大收样量

-80℃干冰
全血/血清样品用抗凝管保存的外周血 5~10ml,骨髓 1~3ml; -80℃保存不超半周的白细胞匀浆>400μl,每 400μl 加入 400μl Trizol。-80℃干冰
石蜡包埋样品由标准的石蜡包埋盒包埋的石蜡块,有效厚度大于 0.1cm; 新鲜的 FFPE 组织切片,每片厚度不超过 10μm,2~8 张,表面积不超过 250mm2。-20℃冰袋
抗体

1. 按样本种属提供满足相应实验要求的抗体;

2. 按抗体说明书要求寄送,尽量避免分装;如分装,确保量足够进行实验,并提供抗体说明书。

3.保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记,抗体的量应大于实验所需的量。

-20℃冰袋
引物干粉,≥1OD,如进行预实验,每个基因至少提供两对引物, 附带公司引物合成单。-20℃冰袋或常温




细胞交付标准.jpg