相关实验
实验承诺函
咨询记录
技术文章
城市
时间
浙江省台州市
2025-11-02 01:34:29
江苏省苏州市
2025-11-01 21:41:09
江苏省苏州市
2025-10-31 23:43:55
江苏省苏州市
2025-10-31 23:43:37
江苏省镇江市
2025-10-31 13:30:35
江苏省苏州市
2025-10-31 07:45:27
江苏省苏州市
2025-10-31 06:04:03
江苏省南通市
2025-10-29 18:16:21
浙江省杭州市
2025-10-27 19:57:02
江苏省南通市
2025-10-27 18:33:32
TSA 放大技术如何提升检测信噪比？【TSA 检测外包】
2025-09-25 11:45:59
TSA 放大技术怎么选？不同场景下的选型指南与注意事项
2025-09-22 18:18:58
为什么选择TSA放大技术？
2025-09-19 16:42:50
做多重荧光总翻车怎么办？TSA 信号放大 10-1000 倍！mIHC 五标六色实测稳
2025-09-08 18:31:17
蛋白原核表达-从原理到实操超详细教程【蛋白表达】
2025-09-05 10:39:38
攻克蛋白表达难题？原核表达系统解锁高产量、低成本的重组蛋白制备新方案！
2025-09-04 11:55:11
二抗法与TSA 法：免疫荧光实验方法怎么选？看完这篇就懂
2025-09-02 17:26:48
什么是 RNP 法KO细胞株服务？
RNP（核糖核蛋白复合物）法 KO 稳株服务，是将预先组装好的 Cas9 蛋白与向导 RNA（gRNA）形成的 RNP 复合物，通过电穿孔技术精准导入目标细胞，实现特定基因稳定敲除（KO）的专业服务。我们依托优化的 RNP 组装体系与高效电转平台，针对客户需求设计个性化方案，构建遗传背景清晰、表型稳定的 KO 细胞株，为科研与药物研发提供核心实验模型。
RNP 复合物组装：将高活性 Cas9 蛋白与靶向目标基因的特异性 gRNA 在体外进行组装，形成具有高度靶向性的编辑复合物。
电穿孔导入：利用电转仪产生的瞬时电场在细胞膜上形成微孔，使 RNP 复合物高效进入细胞，相比传统病毒转染或质粒转染，大幅提升编辑效率与细胞存活率。
精准基因敲除：进入细胞的 RNP 复合物快速识别靶基因序列并切割，触发细胞内源性 DNA 修复机制（非同源末端连接 NHEJ），最终实现目标基因的稳定敲除。
低脱靶保障：RNP 复合物在细胞内半衰期短（24-48 小时），可快速降解，显著降低长期表达导致的脱靶效应，同时避免外源基因整合带来的基因组干扰
超高精准性：RNP 复合物直接作用于靶序列，无外源 DNA 整合，结合短半衰期特性。
高效转染：电转技术适配多种难转染细胞（如免疫细胞），高于脂质体转染。
快速交付：优化的 RNP 组装-电转-筛选流程，无需等待蛋白表达，稳株构建周期缩短至8-12周。
细胞友好：低电压脉冲设计减少细胞损伤，适合珍贵细胞样本。
广泛适用：覆盖肿瘤细胞、免疫细胞（如 T 细胞、NK 细胞）等 200 + 细胞类型。
标准化服务流程
1. 需求定制：深入沟通客户研究目标（如基因功能、药物筛选）、靶基因信息及细胞特性（如细胞系 / 难转染程度），提供全面的可行性评估报告与个性化方案。
2. RNP 设计与组装：根据靶基因序列设计2条高特异性 gRNA。
3. 细胞电转与培养：将 RNP 复合物通过电转入细胞，置于专用培养体系中恢复培养，实时监测细胞状态。
4. 单克隆筛选与鉴定：采用流式细胞分选获得单克隆细胞，通过 PCR 扩增靶基因片段、Sanger 测序验证敲除效率，筛选纯合子克隆。
5. 交付与售后：交付合格 KO 细胞株（含冻存管2支）、完整实验报告（含 gRNA 序列、测序结果），提供 1 个月技术支持，解答后续培养与实验疑问。
1. 基因型验证：采用Sanger 测序确认靶基因敲除类型（移码突变 / 片段缺失）
2. 细胞质控：
(1) 支原体检测：PCR 法检测支原体，结果阴性方可交付。
(2) 追溯体系：每批次实验保留检测原始数据，支持结果溯源与重复验证。
(3) 表型验证：可根据客户需求，加做细胞增殖（CCK-8）、凋亡（流式 Annexin V）、功能标志物表达（Western Blot / 流式）等表型变化检测服务。
1. 基因功能研究：构建特定基因 KO 稳株，通过对比野生型与 KO 细胞的转录组、代谢组差异，解析基因在细胞周期、信号通路、疾病发生中的调控机制。
2. 肿瘤研究与药物筛选：针对肿瘤驱动基因（如 EGFR、KRAS）构建 KO 稳株，用于验证药物靶点有效性，或筛选靶向该基因的小分子药物、抗体药物。
3. 细胞治疗研发：在 CAR-T 细胞、iPSC 等细胞治疗领域，通过 RNP 电转敲除 PD-1、TCR 等基因，增强细胞治疗效果，降低免疫排斥风险。
4. 传染病研究：敲除病毒受体基因（如 ACE2、CD4）构建抗病毒细胞模型，用于病毒入侵机制研究及抗病毒药物筛选。
5. 遗传病模型构建：模拟人类遗传病相关基因突变（如囊性纤维化 CFTR 基因、镰状细胞贫血 HBB 基因），建立 KO 细胞模型，助力发病机制研究与基因治疗方案开发。
某三甲医院肿瘤研究所需构建结直肠癌细胞KO细胞株（靶基因为NPSR1），传统脂质体转染效率不足30%。我们采用RNP电转法，优化参数后转染效率达80%，8周成功交付KO单克隆纯合子，经团队后期Western blot检测，NPSR1基因敲除率100%。
某高校附属医学院肝病研究所需敲除原代肝癌细胞中的UPG基因以进行药筛。我们通过设计2条gRNA与Cas9蛋白组装，并使用RNP电转法在原代肝癌细胞中成功实现了UPG基因的杂合敲除，单克隆细胞存活率100%。
某高校发育生物学团队需在小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系（Raw264.7）中敲除EGR1基因，由于细胞半悬浮半贴壁生长，传统脂质体转染及慢病毒法敲除效率低、周期长，我们采用低损伤RNP电转方案，设计3条sgRNA，最终获得 EGR1 KO细胞池（多克隆），团队继续进行单克隆筛选。
电话：400-691-6686
在线时间：8:00-24:00
微信关注公众号
湘公网安备