从造模到评价：脓毒症CLP手术标准操作流程

Question：脓毒症CLP手术标准操作流程？（普拉特泽生物提供长期稳定的动物实验外包服务）

 答：一、CLP模型的核心价值与适用场景

脓毒症研究中，盲肠结扎穿孔(CLP)模型因其高度模拟人类脓毒症病理过程，成为临床前研究的金标准。最新《Nature Protocols》指出，规范的CLP操作可使实验重复性提升至85%以上。

三大不可替代优势：

▲多微生物感染：真实再现肠道菌群移位

▲疾病进展可控：通过结扎程度调节严重度

▲全程模拟：覆盖炎症风暴期→免疫抑制期

二、术前标准化准备流程

1. 实验动物筛选

2.关键耗材准备

▲手术器械包：含显微剪（15mm刃长）、无齿镊、6-0缝合线

▲麻醉系统：异氟烷挥发罐（诱导3%，维持1.5%）

▲体温维持：恒温手术台（37±0.5℃）

3. 术前处理

●禁食12小时（自由饮水）

●称重并编号（耳标/电子芯片）

●术区备皮（脱毛膏+碘伏消毒）

三、手术操作分步详解（含视频关键帧）

步骤1：麻醉与体位固定

▲诱导箱预充3%异氟烷（氧流量1L/min）

▲维持阶段采用鼻锥给氧（1.5%异氟烷）

▲俯卧位固定（四肢胶带轻柔固定）

步骤2：手术入路建立

▲中线切口（剑突下1cm至耻骨上）

▲钝性分离肌肉层（避免损伤膀胱）

▲用预湿纱布推开肠道，暴露盲肠

关键技巧：使用显微拉钩可减少组织损伤

步骤3：盲肠处理标准化

操作要点：

▲结扎位置：距回盲瓣5±0.5mm

▲穿刺深度：贯穿肠壁（可见粪便溢出）

▲挤压手法：轻柔推出约1mm³粪便

步骤4：关腹与术后护理

●逐层缝合（6-0可吸收线）

●皮下补液（预热生理盐水1ml/20g）

●镇痛管理（布托啡诺5mg/kg q12h）

●单独笼养观察（避免同类攻击）

四、模型验证与评价体系

1. 生理指标监测

2. 血清标志物检测

●早期炎症：IL-6>500pg/mL（ELISA法）

●器官损伤：ALT>80U/L，Cr>0.5mg/dL

●预后指标：降钙素原(PCT)>2ng/ml

3. 组织病理学评估

HE染色：肺/肝/肾炎症浸润评分

免疫组化：Ly6G+中性粒细胞计数

透射电镜：线粒体损伤程度

五、7大常见问题解决方案

术后存活率过高

→ 检查结扎是否完全（建议使用手术显微镜）

→ 增加穿刺孔数量（但不超过3个）

炎症反应不明显

→ 验证菌群状态（术前不用抗生素）

→ 采用粪液增强（FIP联合模型）

手术时间过长

→ 固定专职操作人员

→ 使用预装器械包（节省40%时间）

六、配套资源推荐

1. 实验辅助工具

智能监测系统：植入式体温芯片（DS1922F）

手术视频库：4K显微操作示范（含关键帧标注）

数字化评分表：自动生成病理报告

2. 质量控制服务

术者资质认证（通过率<60%）

微生物负荷检测（确保107-108 CFU/mL）

组织标本代分析（48h出报告）

结语：技术演进方向

2024年CLP模型将迎来三大革新：

AI辅助手术导航：实时提醒解剖变异

器官芯片联用：离体验证机制

无菌动物定制：明确菌群作用

  如果你总是在做实验时总会遇上这样那样的问题需要帮助时，请记得在动物实验中遇到技术问题可添加技术微信：18570028002

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