固定液选择与通透处理全方案优化由普拉特泽生物给大家解答与分享，普拉特泽生物细胞检测平台可承接各种细胞检测外包服务，包括检测细胞凋亡、细胞增殖、细胞侵袭等实验外包服务，本文是我们在承接数百例EdU检测中，对操作过程中的常见问题与大家留言咨询最多的问题进行回答与建议，快来收藏吧！

组织样本的特殊性常导致信号弱、背景高、形态破坏三大痛点。普拉特泽生物针对固定液选择与通透处理两大核心难点，提供经实战验证的解决方案

——组织EdU检测的三大核心挑战

固定与通透的平衡困境

→过度固定：醛类固定剂过度交联导致抗原遮蔽，阻碍EdU点击反应

→通透不足：组织致密结构阻碍试剂渗透，深部细胞标记失败

→核酸移位风险：酸性/醇类固定液引起DNA迁移，定位失真

组织自发荧光干扰

尤其常见于：

富含弹性蛋白的组织（血管、肺）

含脂褐素的衰老组织（脑、肝）

多重标记兼容性差

需同时满足：

EdU点击化学效率

目标抗原表位保存

细胞结构完整性
——固定液选择：科学匹配组织类型

█ 醛类固定剂：首选4% PFA的精准控制

适用组织：大多数软组织（脑、肝、肾、肿瘤）

优化方案：

- 浓度：4% PFA（pH 7.4）  

- 时间：室温2-4小时（或4℃过夜）  

- 关键：灌注固定 > 浸泡固定（尤其对脑组织）  

禁忌：

避免使用含乙酸的固定液（如Bouin's液）—— 引起DNA片段化

█ 醇类固定剂：特殊场景的替代方案

适用场景：

需要保留磷酸化表位（如p-Histone H3）

脂肪组织（减少脂质流失）

推荐配方：

- 冰乙醇:冰醋酸 = 3:1（v/v）  

- 4℃固定1-2小时  

缺陷：可能导致组织收缩

█ 复合固定剂：平衡形态与抗原保存

推荐配方：

- 4% PFA + 0.5% 戊二醛（增强硬度）  

- 适用：骨组织、软骨  

- 警告：戊二醛>1%将淬灭荧光！  

——通透处理：突破组织屏障的关键

目标：打开生物膜屏障，允许>500Da分子通过

█ 通透剂选择矩阵

进阶通透策略

梯度通透法（针对厚组织切片）

减少边缘过度通透导致的组织脱落

酶辅助通透

推荐：

胶原蛋白酶IV（1mg/ml，37℃×15min）→ 纤维化组织

透明质酸酶（2U/μl，37℃×30min）→ 富含胞外基质组织

——实战工作流：组织EdU检测七步法

▲活体标记：EdU腹腔注射（5mg/kg）

▲灌注固定：4% PFA心内灌注（优于浸泡固定3倍！）

组织处理：

▲脱水：30%蔗糖溶液沉底（防冰晶）

▲包埋：OCT > 石蜡（避免高温抗原破坏）

▲切片通透：0.5% Triton + 0.1% 皂苷混合液×45min

Click反应：

- 试剂：Click-iT® Plus EdU Kit（货号：C10637）  

- 染料：AF647（避免自发荧光干扰）  

- 时间：避光30min（延长至60min穿透>50μm切片）  

抗体染色：抗目标抗原抗体（如Ki-67、GFAP）

自发荧光阻断：

0.1% 刚果红（淬灭脂褐素）

0.3M 甘氨酸（减少醛基荧光）

——组织特异性优化方案

——故障排除：拯救失败实验

——三维组织EdU成像

透明化技术联用

流程：

优势：实现全器官增殖细胞定位

多重免疫-EdU标记

案例：

EdU-AF647（增殖细胞）

CD31-AF555（血管）

α-SMA-AF488（成纤维细胞）

关键：采用酪酰胺信号放大（TSA）提升弱抗原信号

——最后的最后

组织EdU检测的成功取决于：

精准匹配的固定方案 + 阶梯式通透策略 + 组织特异性优化。

遵循“温和固定、梯度通透、红外染料避让自发荧光”三大原则，可突破90%以上的技术瓶颈。
如果想知道更多的关于EdU检测的相关案例和知识点，以及专属研究方法，也可以联系我们：18570028002 或微信 pulateze666会把这些资料发送给大家哦。