一、 为什么你的多重荧光总是在“翻车”？

多重荧光的复杂性决定了其高失败率，主要痛点集中在：

1. 信号太弱：尤其是表达量低的靶点，勉强能看，但根本拍不出高质量的图片用于发表。

2. 背景太高：内源性荧光、非特异性结合、抗体浓度不当，导致信噪比惨不忍睹。

3. 通道串色：抗体交叉反应、荧光染料光谱重叠严重，结果根本没法看，更别提分析了。

4. 一抗种属限制：想同时做多个指标，却发现一抗都来自同一种属，传统方法直接束手无策。

这些问题的核心在于传统荧光技术的信号强度和创新色能力已触及天花板。你需要一种更强的技术来突破极

二、 破局利器：TSA技术如何实现信号放大10-1000倍？

TSA技术（Tyramide Signal Amplification），又称酪胺放大技术，是多重荧光领域的“游戏规则改变者”。它的原理堪称巧妙：

1. HRP催化：一抗与靶标结合后，带有的HRP（辣根过氧化物酶）二抗会紧随其上。

2. 引爆反应：当你加入带有荧光基团的酪胺底物时，HRP会立即催化附近的酪胺分子。

3. 原位沉积：被激活的酪胺分子在HRP所在的靶点位置瞬间形成大量、高密度的荧光沉淀物，直接将信号放大数十倍乃至上千倍！

这意味着：

• 再微弱的信号也能被清晰捕获，轻松实现低表达靶点的检测。

• 极高的信噪比：信号强而特异，背景问题迎刃而解。

• 突破色数限制：由于信号极强，可以使用浓度极低的一抗，并通过循环剥离/再标记流程，轻松实现5标、6色甚至更多，完美解决同种属一抗难题。

三、 实测见证：五标六色mIHC，结果稳到不可思议！

理论说再多，不如实测有说服力。在我们长期的技术积累和反复验证中，使用基于TSA技术的试剂盒对珍贵临床样本进行五标六色mIHC实验：

• 结果：所有通道信号明亮清晰，对比度极高，细胞定位精准。

• 串色控制：通过严谨的抗体搭配和流程控制，各通道间无任何可见串扰。

• 稳定性：连续多次重复实验，结果高度一致，批次稳定性远超传统方法。

• 应用场景：完美适用于肿瘤免疫（如CD3/CD4/CD8/FoxP3/PD-L1等多靶点共定位分析）、神经细分研究等复杂课题。

这不仅仅是技术的升级，更是效率和成功率的革命性提升。

四、 如何获取这份“避坑”指南？

看到这里，你是否已经跃跃欲试？噗啦噗啦实验室深知从零开始建立一套稳定的mIHC-TSA protocol有多么困难。为了帮助大家少走弯路、节省经费、更快出成果，我们基于大量重复性实验验证与长期技术积累，总结了一套极其详尽的《mIHC-TSA多重荧光实验权威Protocol及避坑指南》。

资料包含：

• ** step-by-step 标准操作流程（Protocol）**

• 关键步骤注意事项与疑难解答

• 抗体选择与优化技巧

• 荧光染料搭配方案

• 结果分析要点

全部资料，免费分享！我们愿意用我们的经验，为你的科研之路保驾护航：18570028002（微信同号）