案例一
检测服务
案例展示
实验介绍
【应用原理】
细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180~200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素、生物素标记的dUTP,从而可以通过荧光显微镜或化学显色方法检测细胞凋亡的情况。
【技术总结】
一、常见问题
1、无/弱染色
烤片温度过高,推荐56℃-60℃1-2h;
一抗是否适用固定液和石蜡切片,使用浓度是否过低,孵育是否时间过短等。
2、染色过深
染色试浓度过高或孵育时间过长;
显色剂浓度过高或孵育时间过长。
二、注意事项
1、洗涤蛋白酶K时,一定要PBS冲洗3次,如果冲洗不净会严重干扰后续的标记反应;
2、3%的过氧化氢溶液孵育时间不应过长,否则会出现过氧化氢导致的DNA断裂,产生假阳性;
3、滴加TUNEL检测液时,可利用防蒸发膜防止其蒸发影响样本的生物素标记;配制好的DAB显色液必须一次性使用完毕,不宜冻存。
【交付标准】
1、实验报告
2、真实实验结果
3、原始图片
4、实验原始数据
5、剩余物料在周期内可返还(超过周期,不予返还)
技术文章
更多文章咨询记录
| 城市 | 咨询内容 | 时间 | |
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