【应用简介】

原核生物的rRNA碱基序列非常保守，而rRNA操纵子上编码rRNA的DNA间隔区如16S和23S间隔区，各种生物种间的碱基序列差别很大。这个间隔区的 DNA序列及长度在 Mycoplasma 各个种间既有相对保守的部分，也有具有很大差异的部分。本制品是在编码 16S 和 23S rRNA 的 DNA 上设计一对 F1/R1 引物，扩增编码 16S 和 23S rRNA 的 DNA 间隔区。此反应体系只特异性扩增 Mycoplasma DNA，检出灵敏度与特异性都很高。

【技术原理】

通过对支原体特定的序列设计引物，当存在支原体污染时通过PCR特异性扩增，会将目标DNA特异性地复制，然后通过琼脂糖电泳检测，会跑出条带出现阳性结果。反之当没有支原体污染时，由于没有模板，PCR无法扩增，则琼脂糖电泳跑不出条带，出现阴性结果。

【实验方法】

1、引物设计；

2、取待检样本；

3、PCR反应体系配置及PCR扩增；

4、琼脂糖凝胶电泳；

5、条带数据分析；

6、完成。

【案例展示】

M：2000bp Marker;1:阳性对照Pc: Positive  control;2:阴性对照Nc: Negative control;3、4、5：待测样本

3个样本的支原体检测

【技术总结】

1、待检样本取样：

一般是接种后进行 3-6d细胞培养的培养上清液；

如果使用 Eagle 等常用的细胞培养基时，培养上清可直接加入到 PCR 反应液中；

如果使用细胞悬浊液作为样品，则需要提取 DNA，再进行 PCR 反应。    

2、一定要设置阳性对照（一般采用带有支原体特异片段的质粒）与阴性对照（H₂O）；

3、配制PCR反应体系时需在超净工作台里进行，避免污染。

【送检标准】

【交付标准】

1、实验报告

2、真实实验结果

3、原始图片

4、实验原始数据

5、剩余物料在周期内可返还（超过周期，不予返还）