酪酰胺信号放大（TSA，Tyramide Signal Amplification）技术是一种基于辣根过氧化酶（HRP）标记靶蛋白的酶学检测方法。

【技术原理】

TSA原理是利用酪胺（Tyramide）的过氧化物酶反应 ，在 HRP 催化下，酪胺盐形成共价键结合位点，生成大量酶促产物；该产物可与周围蛋白的色氨酸、组氨酸及酪氨酸残基结合，使抗原 - 抗体结合部位沉积大量荧光素，从而将检测信号放大 10-100 倍。该技术的显著优势在于：每次孵育仅加入单一抗体，可彻底避免抗体交叉反应及一抗、二抗的种属匹配问题，大幅降低实验设计中对不同种属抗体选择的限制。例如，同一样本切片上的所有靶标均可选用特异性高的鼠/兔单克隆抗体，且仅需搭配同一支抗鼠/兔HRP二抗即可完成实验。

【实验方法】

1、样本准备：石蜡切片/冰冻切片；

2、过氧化氢封闭内源性过氧化物酶；

3、抗原修复：修复液类型及修复条件需根据组织类型和抗原特性确定；

4、封闭液封闭非特异性结合位点；

5、一抗孵育；

6、二抗孵育；

7、荧光染料反应；

8、多重标记重复步骤（重复3-7）；

9、细胞核DAPI染色；

10、抗荧光淬灭剂封片；

11、镜检拍照。

【案例展示】

小鼠脾脏TSA荧光染色图

【技术总结】

1、采用偶联 HRP 的二抗（而非直接偶联荧光素的二抗），催化后续加入体系的非活性荧光素；

2、 在 HRP 与 H₂O₂的作用下，荧光素被活化，并与样本中邻近蛋白的酪氨酸残基形成共价偶联，实现荧光素与蛋白样品的稳定结合；

3、通过微波、煮沸或水浴等热修复处理，洗去非共价结合的抗体，仅保留共价结合在样本切片蛋白上的荧光素；

4、 更换新的一抗进行下一轮孵育，重复上述流程；待所有抗体孵育完成、荧光素均稳定结合后，即可进行结果检测。

【送检流程】

【交付标准】

1、实验报告

2、原始实验数据

3、剩余物料返还