【技术应用】

研究启动子结合蛋白的经典方法，是一种用于定性和定量分析核酸蛋白相互作用的技术，其基本原理是末端标记的核酸探针可以与蛋白质结合，电泳时这种复合物相对没有结合蛋白的探针在凝胶中移动的速度慢，即表现为相对滞后。该方法不仅简单迅速且灵敏度高；另一方面它可以用竞争性试验来评价蛋白和核酸结合的特性。目前用于检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白，并可通过加入特异性抗体来检测特定的蛋白质，结合蛋白双向电泳及质谱技术进行未知蛋白的鉴定分析。可用于检测某一特定的DNA或RNA序列与某一个特定的蛋白质之间是否存在相互作用关系或者用于验证预测结合的核苷酸序列。

【技术原理】

实验基于非变性凝胶电泳，带有标记的游离 DNA 探针分子量小、电泳迁移速度快；当探针与样本中的转录因子等蛋白特异性结合形成复合物后，整体分子量增大、空间结构改变且负电荷被部分中和，电泳迁移速率减慢，在凝胶上出现位置更靠上的阻滞条带，以此可定性判断蛋白与核酸的结合作用，结合竞争实验、抗体超迁移实验还能进一步验证结合特异性与目的蛋白种类。

【案例展示】

【技术总结】

优势：

1. 可用目的蛋白的重组蛋白与DNA或RNA探针进行验证，避免非常规物种缺少抗体的困扰。

2. 是用于验证反式作用因子（如转录因子）与正式作用元件（如启动子）结合的经典技术。

3. 可定义核酸序列与蛋白质的直接互作关系。

4. 可分析结合位点（设计野生型及突变型探针）。

不足：
1. 探针为人工合成，无法完全模拟特定生理状态下的结合。

2. 如果是用于检测转录因子活性，无法判断结合启动子后对靶基因的转录活性。

3. 必须已知DNA或RNA序列，才能设计探针。

【送检标准】

【交付标准】

1、实验报告

2、真实实验结果

3、原始图片

4、实验原始数据

5、剩余物料在周期内可返还（超过周期，不予返还）