【应用简介】

核酸和蛋白质是组成生命的主要生物大分子，两者的相互作用是构成生命活动的生长、繁殖、运动、遗传和代谢等生命活动的基础。研究蛋白质和核酸间的相互作用是人们探索生命现象奥秘的关键，ChIP检测实验是应用于蛋白与核酸互作关系的重要参考。

【技术原理】

ChIP实验在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。

【实验方法】

1、细胞培养物交联和样品制备

2、胞核制备和染色质消化

3、染色质消化和浓度分析

4、染色质免疫沉淀法

5、将染色质从抗体/Protein G Magnetic Beads上洗脱下来并解交联

6、使用离心柱纯化 DNA

7、用 PCR定量 DNA

【案例展示】

1、阳性对照组条带清晰无杂带，阴性对照组正常，表明CHIP实验结果可信，操作合格；

2、Input组条带清晰可见，表明PCR扩增引物可用于该指标的检测；

3、样本组1和样本组2中检测XX蛋白组均有条带，表明该研究的基因的启动子区和XX蛋白可发生结合。

【技术总结】

一、常见问题

1、消化的染色质浓度过低。

2、染色质消化不足且片段过大（大于900 bp）。

3、样品输入对照组PCR反应中无产物或产物很少。

4、阳性对照组蛋白H3-IP RPL30 PCR反应中无产物。

5、阴性对照 Rabbit IgG-IP 和阳性对照 Histone H3-IP PCR 反应中产物的数量相等。

二、注意事项

1、ChIP实验要求必须是新鲜的组织或活细胞，一次实验需至少需要150 mg新鲜的组织或2x10⁷个细胞，如不能提供新鲜的组织或活细胞，请联系客服，获得预处理方法；

2、部分抗体级别可能达不到ChIP级别的要求，需要采购对应级别的抗体并通过阴阳性实验反馈结果可信性；

3、ChIP对照：现有阳性对照H3和阴性对照IgG；

4、采用CST品牌的SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads)试剂盒用于本实验。

【送检标准】

【交付标准】

1、实验报告

2、真实实验结果

3、原始图片

4、实验原始数据

5、剩余物料在周期内可返还（超过周期，不予返还）