PCR（Polymerase Chain Reaction）原理： 即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。

用ELISA测定相关炎症因子，来阐明巨噬细胞中Cbl-可选择性抑制由不同毒素诱导经典及非经典NLRP3炎性小体的IL-1β释放，而并不抑制TLRs信号通路。之后在腹腔注射LPS（5 mg/kg）及盲肠结扎穿刺诱导的内毒素血症模型中，发现Cbl-b基因缺失小鼠更易致死。因此认为Cbl-b可能是内毒素血症缓解的重要因子。

苏木化修饰是苏木小体在一系列相关酶（E1活化酶、E2结合酶和E3连接酶）的作用下，通过SUMO的3’端和靶蛋白的赖氨酸残基的ε-氨基之间形成异肽键的结合，调控底物蛋白结构与功能的一种重要的翻译后修饰类型。苏木化在生理及病理过程中扮演着重要的角色，与很多疾病息息相关，如，肿瘤、心血管系统疾病、脑损伤疾病等。所以说，通过两篇文献来get一下这个知识点是非常有必要的呦~

这次分享的文献题目是：CHIP-mediated CIB1 ubiquitination regulated epithelial-mesenchymal transition and tumor metastasis in lung adenocarcinoma，影响因子为15.820分，发表在Cell Death & Differentiation杂志上，发表时间为2020年10月，该文章主要探究了CHIP介导CIB1泛素化过程，从而调控肺腺癌的上皮-间质转化和肿瘤的转移。接下来通过作者得到的实验结果来分析这篇文章吧!

泛素化是指泛素（一类低分子量的蛋白质）分子在一系列特殊的酶作用下（涉及泛素激活酶E1、泛素结合酶E2和泛素连接酶E3），将细胞内的蛋白质分类，从中选出靶蛋白分子，并对靶蛋白进行特异性修饰的过程。泛素化在蛋白质的定位、代谢、功能、调节和降解中都起着十分重要的作用。而且，它还参与细胞周期、增殖、凋亡、分化、转移、基因表达、转录调节、信号传递、损伤修复、炎症免疫等几乎一切生命活动的调控。泛素化与多种疾病类型如肿瘤、心血管等发病密切相关。因此，泛素化的研究越来越多

作者通过他们前面的研究中筛选出CIB1这个蛋白作为研究目标，通过对临床组织进行一系列实验以及了解CIB1对肺腺癌的预后情况，再在细胞层面上过表达/敲除CIB1得到其对肺腺癌细胞功能学实验的影响。其次，通过Co-IP和质谱筛选出与CIB1结合的蛋白CHIP，通过一系列实验证明了CHIP可以通过泛素-降解途径影响CIB1的表达，并得到泛素的K48以及CIB1的K10和K65位点参与CHIP对CIB1的表达。最后，采用回复实验，在细胞层面和动物层面验证CHIP对CIB1的调控关系。

1. 创新型除了与探究的lncRNA的机制有关，也与研究的下游表型，以及lncRNA本身有关。并不是说哪种机制就更新颖。2. RIP，RNA pull down，CHIP，Co-IP这些技术是研究lncRNA与蛋白关系的关键技术，如果想要往这方面尝试的同学务必掌握牢固。3. 综合两种以上的机制，甚至是将ceRNA也融合进来，是常用的增加文章的层次的方法。

作者发现HDAC8的抑制能降低胶质瘤的生成，延长小鼠的生存周期。 研究发现HDAC8调节α-tubulin蛋白乙酰化从而驱动胶质瘤细胞迁移和侵袭。 研究HDAC8对GAMs迁移及抗炎表型的调控作用。最后，探讨HDAC8能否触发NK细胞中的NKG2D，从而增强其细胞毒性。

参与m6A的蛋白可以分为writers，erasers和readers三类，其中writers往核苷酸上添加上甲基，erasers去掉核苷酸上的甲基，readers则是能够识别带有甲基修饰的核酸序列。

关于lncRNA与转录因子的技术总结 1. LncRNA可以受转录因子的调控，也可以调控转录因子的功能，这两种功能可以单独成文，也可以串起来增加文章的丰度。 2. 由于肿瘤的缺氧特性，HIF-1α是最常用作lncRNA的上游调控的转录因子，除了HIF-1α外，还有SP1, P53，也常有文献报道。 3. 上述这篇文献的实验设计很精致，可以作为此套路的范例参考。

关于lncRNA与RBP的技术总结 1. 关键的验证内容是lncRNA与RBP的结合，以及lncRNA对RBP与mRNA结合稳定性的调控 2. 一般来说不需要再深入研究lncRNA与RBP的机制 3. RBP存在功能多样性，可以正向，负向调控下游mRNA的稳定性 4. 如果没有做质谱的条件，也可以参考预测软件的结果找到lncRNA可能结合的RBP

circRNA(circular RNA,环形RNA)是非编码RNA分子的一种，它具有以共价键形成闭合环状结构, 不存在有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴。circRNA大量存在于真核转录组中，不受RNA外切酶影响,表达更稳定不易降解。相当一部分circRNA都是由外显子序列构成,在不同的物种中具有保守性,同时存在组织及不同发育阶段的表达特异性。