细胞侵袭实验注意事项

细胞侵袭实验注意事项由普拉特泽生物为大家总结分享，普拉特泽生物细胞实验平台专业承接细胞衰老实验外包、细胞诱导/分化等细胞实验代做服务，积累专业丰富的实验操作经验。上期我们分享细胞侵袭实验常见问题与解决方案后大家都说不够详细，有一些注意事项没有写出来，那今天咱们就为大家专门出一期细胞侵袭实验注意事项，快点学起来吧！

细胞侵袭实验（Cell Invasion Assay）是研究肿瘤转移、药物筛选的重要技术手段。然而据《Nature Protocols》统计，高达35%的实验失败源于操作细节疏忽。下面详解10个关键注意事项，帮助大家获得准确可重复的实验结果。

一、实验设计阶段：3个核心控制点

1. 基质胶（Matrigel）标准化处理

4℃缓慢解冻避免胶体结构破坏

①使用预冷枪头按推荐稀释比例（通常1:8-1:10）与无血清培养基混合

②每孔均匀铺胶（建议50-100μl），37℃聚合1-2小时

2. 细胞悬液制备规范

①消化时间精确控制（胰酶作用±30秒显著影响侵袭力）

②悬浮密度优化：常规设置5×10⁴~1×10⁵ cells/well

③必须通过台盼蓝染色法确认细胞活性＞95%

3. 对照组科学设置

⒈阳性对照：已知高侵袭力细胞系（如MDA-MB-231）

⒉阴性对照：添加基质金属蛋白酶抑制剂（GM6001）

⒊空白对照：无细胞上清培养验证背景值

二、实验操作关键环节：5个易错点解析

4. 小室平衡处理

Transwell小室预先用无血清培养基润湿30分钟

移液枪避免触碰聚碳酸酯膜（孔径通常8μm）

5. 梯度浓度诱导设置

趋化因子（如FBS）浓度梯度建议：0%-5%-10%-20%

下层培养液体积需完全浸没膜底面

6. 培养环境控制

CO₂浓度稳定在5%

湿度＞90%防止边缘效应

培养时间根据细胞类型优化（常规24-72小时）

7. 固定染色标准化

4%多聚甲醛固定20分钟（超时导致细胞脱落）

0.1%结晶紫染色15分钟后梯度脱水

棉签擦拭非侵袭面细胞的3个技巧：

保持棉签单向滚动

PBS湿润棉签减少摩擦

显微镜下确认擦拭效果

8. 数据采集规范

推荐使用ImageJ自动计数插件

至少随机选取5个视野进行统计

结果需换算为侵袭细胞数/mm²

三、结果分析阶段：2个验证要点

9. Western Blot联合验证

检测MMP-2/MMP-9表达水平

分析E-cadherin/N-cadherin转化情况

10. 数据标准化处理

采用相对侵袭率公式：

（实验组细胞数 - 空白对照）/ 阳性对照 ×100%

重复实验≥3次取平均值