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CHIP、RIP、COIP有什么区别?——CHIP/RIP/COIP检测外包

2022-03-05 16:25:22

来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台

   CHIP 染色质免疫共沉淀、 RIP RNA结合免疫蛋白沉淀、 CO-IP 免疫共沉淀的区别与不同由普拉特泽生物的分子检测平台实验室总结分享,从定义、检测方法、研究目的等三个方面来给大家详细解释,普拉特泽承接线下包括分子、细胞、组织染色等各项生物科研实验外包服务,同时旗下科研培训品牌《春风学院》还为广大科研人员提供线上下实验技术培训,come everybody !一起学习吧。

   首先我们来看看,什么是IP(免疫沉淀)技术?

   IP技术免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)是利用抗原抗体特异性反应纯化富集样品中目的蛋白的一种方法。通常使目标蛋白同抗体-protein A/G形成免疫复合物沉淀而得以收集。

   根据不同种类的检测目标,我们可以将IP技术分为:CHIP、RIP、ChIP

   IP富集蛋白,检测与其结合的DNA的方法即为ChIP;

   IP富集蛋白,检测与其结合的RNA的方法即为RIP;

   IP富集蛋白,检测与其结合的蛋白的方法即为COIP

   
   接下来就一一介绍这个
IP家族的3兄弟:

   ChIP(染色质免疫沉淀法):

   染色质免疫沉淀法 (ChIP)是一种基于抗体的技术,可用来选择性地使DNA 结合蛋白及其 DNA 靶标富集。ChIP 可用来研究某种特殊的蛋白-DNA 相互作用、多种蛋白-DNA 相互作用或全基因组或部分基因内的相互作用。通常,ChIP 用来检测某种特异蛋白或某种特异蛋白修饰在某个基因组区域的相对丰度。并依赖于使用一种抗体从细胞或组织提取物蛋白混合物中分离某种蛋白、组蛋白、转录因子或辅因子及其结合的染色质,或使之沉淀。因此,这种技术的名称为:染色质免疫沉淀法。在 ChIP-PCR 或 ChIP-seq 中,使用广泛提供的 PCR 或 qPCR 试剂和下一代测序 (NGS) 技术便能检测和定量免疫富集的 DNA 片段。ChIP 可以用来回答大量涉及蛋白和染色质相互作用的科学问题。例如,ChIP 可用来比较某些蛋白在各位点上的存在情况,绘制某个目的基因组区域内的各种蛋白图,或定量能够在受到刺激一段时间后结合诱导基因的蛋白。


   RIP(RNA免疫沉淀法):

   RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行分析。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物,RIP实验的优化条件与ChIP实验不太相同(如复合物不需要固定,RIP反应体系中的试剂和抗体绝对不能含有RNA酶,抗体需经RIP实验验证等等)。RIP技术下游结合microarray技术(微阵列)被称为RIP-Chip,帮助我们更高通量地了解癌症以及其它疾病整体水平的RNA变化。

   CoIP(免疫共沉淀法):   

   免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CO-IP)是利用抗原与抗体之间的专一性作用,用于研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的经典方法。利用免疫共沉淀可以检测两个已知蛋白之间的相互作用,或者利用已知蛋白寻找与之相互作用的未知蛋白。是将样品中同抗体靶蛋白相互作用的蛋白一同随免疫复合物沉淀,可以检测两种目标蛋白质是否在体内存在相互作用,也可以确定一种蛋白在体内的相互作用蛋白。免疫共沉淀的设计理念是,假设一种已知蛋白是某个大的蛋白复合物的组成成员,那么利用这种蛋白的特异性抗体,就可能将整个蛋白复合物从溶液中“拉”下来(常说的“pull-down”),进而可以用于鉴定这个蛋白复合物中的其他未知成员。免疫共沉淀的特点可以概括为两点,第一是天然状态,第二是蛋白复合物。



COIP 蛋白互作


   那么到这里关于chip、rip、coip的区别于不同我们就讲完啦,大家都学会了吗?欢迎踊跃留言补充其他的区别或者留下你的问题给客服,咱们技术会给到很细致的回复哦。