什么是OD值：为什么可以用OD600检测菌液浓度？

Question：为什么可以用OD600检测菌液浓度？（普拉特泽生物提供长期稳定的细胞实验外包服务）

答：

OD值是“Optical Density”（光密度）的缩写，用于表示被检测物吸收光的程度，通常用分光光度计来测量OD值，具体是如何检测的呢，比如说你有一束手电筒的光，光通过一个透明的瓶子（样品池），瓶子里装了不同的液体。如果液体很清澈，大部分光都能透过，检测器测到的光就多；如果液体很浑浊，光被吸收得就多，检测器测到的光就少。分光光度计就是通过测量这种光的透过和吸收，来计算OD值，从而了解样品的性质。

OD值与吸光度的关系

在光谱分析中，经常用到两个概念：吸光度和透光率。

吸光度（Absorbance，简称A或Abs）表示光线通过样品时被吸收的程度。

透光率（Transmittance，简称T或Tra）表示光线通过样品后剩余的光强度与原始光强度的比例，即T = P/P0，其中P是透过样品的光强度，P0是入射光强度。

吸光度和透光率之间的关系：A=−log(T)

其中A代表吸光度，T代表透光率。

这个公式表明，吸光度和透光率是相反的关系：吸光度增加，透光率减少；反之亦然。

OD值实际上就是吸光度的另一种说法。在实际应用中，我们通常用吸光度来表示物质对光的吸收程度，因此OD值等同于吸光度A。

OD600?OD450?OD260/230是什么?为什么用OD600来检测菌的浓度？

OD值后面的数字，比如OD600或OD450，指的是在测量时使用的光的波长，单位是纳米。这些波长的选择基于不同物质对特定波长光的吸收特性

OD450：在ELISA实验中常用，450nm是底物反应后产物的最大吸收波长。

OD260 / OD280：用来测核酸和蛋白浓度，DNA在260nm处吸光强，蛋白在280nm处吸光强。

OD600：常用于监测细菌的生长，如大肠杆菌。这是因为600纳米的光对细菌的散射非常敏感；在微生物实验中，它是常用的生物量测定方法之一，能够间接反映菌液中的细胞数量

为什么OD600能够用来检测菌液浓度，其原理基于以下两点：

①光吸收与散射：菌液中的细胞会吸收部分入射光，同时散射另一部分光。测得的OD值600与细胞对光的吸收和散射总量成正比。

②与浓度关联：OD值600越高，表明菌液中细胞数量越多；反之，OD值600越低，细胞数量越少。

为什么选择600nm波长？
①细胞吸收特性：细菌细胞（如大肠杆菌）在600nm波长处的光吸收能力最强。此波长与细菌细胞的平均尺寸（1-5微米）相匹配，使得光散射和吸收效果最显著，从而提高了测量的敏感性。
②避免培养基干扰：常用培养基（如LB培养基）在600nm处的光吸收极低，因此测得的OD值600主要反映菌体浓度，而非培养基的颜色或成分。
③历史经验校准：科学家通过大量实验发现，600nm波长与细菌浓度的线性关系最佳。例如，当OD600≈1.0时，大肠杆菌的浓度约为1×10⁹ CFU/mL（ colony-forming units per milliliter，即每毫升菌落形成单位）。这一发现使得600nm波长成为行业标准。测量注意事项为确保OD值600测量的准确性，

需注意以下事项：①稀释菌液：将菌液稀释至OD值0.2-0.8之间。若OD值过高（如＞1.0），需进一步稀释以避免测量误差；若OD值过低（如＜0.1），则可能因信号太弱而导致结果不准确。②摇匀菌液：测量前需充分摇匀菌液，以确保细胞均匀分布。若菌液沉淀，可能导致测量值偏低。OD值与菌液浓度的关系正比关系：OD值600与菌液浓度成正比，即OD值越高，菌液浓度越高；反之亦然。但需注意，这种关系并非严格的线性关系。

好，今天关于OD600检测菌液浓度

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