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实验介绍
【实验原理】
考马斯亮蓝在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。
【实验方法】
Step1：石蜡切片常规操作脱蜡水化；
Step2：切片复水后经过7%(v/v)醋酸1~2min；
Step3：放入考马斯蓝R染色液中染色15min；
Step4：自水清洗5min后经过蒸馏水；
Step5：脱水：依次经85%、95%Ⅰ、95%Ⅱ各10秒，无水乙醇Ⅰ30s、无水乙醇Ⅱ1min；
Step6：透明：经二甲苯Ⅰ1min、二甲苯Ⅱ2min；
Step7：中性树胶固封，镜检。
案例展示
技术总结
【常见问题】
1、染色时间过长或过短导致的染色过深或过浅；
2、分化液分化时间过长，导致组织染色阳性过浅；
3、特殊组织如植物组织较脆，易出现掉片。
【注意事项】
1、控制染色时间，保证染色不至于过深或过浅，必要时可在显微镜下观察控制染色时间；
2、分化时间不易过长，保证阳性显色清晰可见；
3、特殊组织切片时应控制切片厚度以及摊片时间，减少掉片风险。
送检与交付标准
| 样品类型 | 样品需求 | 保存条件 | 运输条件 | 备注 |
|---|---|---|---|---|
| 新鲜组织 | 新鲜取材组织，用 PBS清洗干净血液等，立即-80℃保存； | -80℃ | 干冰 | 所有样本均须有唯一标记，且标记清晰可识。 |
| 一般固定组织 | 一般组织体积不超过2cmX2cmX0.5cm，固定时尽量保持组织的原有形态并清理干净血液及多余部分，如肠道内容物；固定液体积为组织大小的10倍以上，容器足够容纳组织不使其挤压变形。标注好固定液类型和固定时长； | 常温 | 常温 | |
| 特殊固定组织 | 睾丸、眼球、脊髓、肌肉等组织：推荐使用对应的特殊固定液进行固定，以保证固定效果。如Bouin液，适用于睾丸组织、皮肤组织及眼球的固定； | |||
| 组织蜡块 | 组织由标准的石蜡包埋盒包埋（尺寸为30*24*7mm），石蜡与组织要均匀接合，不能有裂痕；蜡块厚度根据所需切片的数量而定，有效厚度至少要超过0.1cm。尽量提供半年内的组织蜡块，超过半年的蜡块抗原可能丢失，做免疫组化可能出现检测不到蛋白； | 常温 | 常温 | |
| 组织切片 | 需用防脱载玻片进行捞片，并注明切片厚度、已烤片温度与时间，组织应在靠近切片下端 1/3 处； | 4℃ | 冰袋 | |
| 细胞爬片 | 使用 12 孔板或 24孔板专用细胞爬片，细胞爬片经固定后用 PBS 洗涤 2~3 次，保存在 PBS 中，用封口膜密封孔板。每个爬片在孔板盖上应有唯一的标记，并有电子版的分组信息，以防标记在运输途中模糊； | 常温 | 常温 | |
| 植物样本 | 新鲜组织FAA固定，木质化程度不高；对于较薄的叶片，如果要求平行叶片切片，难以保证切完整；根茎要求直径>1mm； | 常温 | 常温 | |
| 抗体 | 保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记，并附带说明书，抗体的量应大于实验所需的量。组织切片、组织芯片按稀释后 100μl 一张切片计算抗体用量， 24 孔板细胞爬片圆形盖玻片按稀释后 200μl一张计算抗体用量，12 孔板细胞爬片圆形盖玻片按稀释后 400μl 一张计算抗体用量。 | -20℃ | 冰袋或干冰 |
电话：400-691-6686
在线时间：8:00-24:00
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