《原位杂交实验操作常见问题答疑》由普拉特泽生物为大家总结分享，本文从原位杂交操作的温度、样本、探针、实验技术优势等方面来详细分析解答。普拉特泽生物病理实验平台专业承接原位杂交等组织细胞的染色观察、检测服务，以专业的科研素养和丰富的实验经验为广大科研人员提供实验服务。

      
        上期我们讲过了原位杂交实验的介绍、步骤、注意事项，大家还记得吗？不记得可以回去复习，链接奉上：

        原位杂交实验……………………………详细介绍

        组织RNA原位杂交……………………………操作步骤

        FISF荧光原位杂交……………………………操作步骤

        原位杂交实验操作……………………………注意事项

        那现在，我们就来一个一个解答大家关于原位杂交的问题吧！

        Qusetion1：怎样保证FISH荧光原位杂交操作时的温度呢？

        答：有条件的情况下可以用荧光原位杂交的专用仪器进行操作。人工操作的话要注意：

        (1)对荧光原位杂交操作过程中可能使用的一些仪器(如水浴锅，孵箱进行温控检查，不符合要求的进行更换)。

        (2)尽可能地保持环境温度在20度以上。

        (3)针对需要预热以达到要求温度的试剂，在使用前必须使用温度计对其进行测温。

        (4)同时检测的样本最好不超过4块，操作中一定要迅速，实验人员要注意一些小部件(诸如载玻片和盖玻片)的温度，尤其是在冬季。

        Qusetion2：同一样本可以多次进行荧光原位杂交吗？

        答：一般情况下，如果操作没有得到理想的结果，是可以将探针洗涤然后进行再次的杂交的。如果使用的是直标型探针，还可以使用不同探针对同一样本进行反复杂交。针对不同的样本，处理方法略有不同。

        Qusetion3：在实际荧光原位杂交操作中，那些因素比较重要?

        答：实验中最重要的因素是温度、光照、湿度和各种试剂的PH值。温度和湿度直接影响着探针和目标DNA/RNA的杂交效率;光照影响着荧光染料的强度，所以探针要避光保存，其已经杂交的片子可用防荧光淬火剂封片目避光保存；各种试剂pH也要精确达到要求，这也直接关系到FISH的稳定性。

        Qusetion4：直标型探针和间标型探针有什么区别？

        答：为什么我们要选择直标型探针?所谓的直标型探针是指探针共价连接荧光表基团，间标型探针则是指DNA探针先与某个半抗原连接，诸如生物素或地高辛，然后半抗原与荧光素基团连接从而形成探针-半抗原-荧光素基团，类似“三明治”的复合物，与间标型探针相比，直标型探针具有低背景，高特异性的特点。随着荧光染料和荧光检测技术的不断发展，直标型探针的灵敏度也不断提高。因而在荧光原位杂交(FISH)检测领域，尤其是在疾病分型领域，探针大多采用直标型设计。

        Qusetion5：FISH荧光原位杂交技术有什么主要优势呢?

        答：（1）安全、快速、灵敏度高。

        （2）探针稳定，能较长时间保存。

        （3）多色标记，简单直观。

        （4）可用于中期染色体及间期细胞的分析。

        （5）可应用于新鲜、冷冻或石蜡包埋标本以及穿刺物和脱落细胞等多种物质的检测。

        好啦，那关于原位杂交大家常问的问题就回答到这里啦，还有更多的需求可以给客服留言，技术会耐心解答，欢迎学术交流！有fish和原位杂交代做需求也可以随时联系我们哦，我们下个实验见！