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细胞焦亡的研究方法与检测方式【附视频教程】

2022-05-18 16:49:59

来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台

        大家好,今天普拉特泽生物继续跟大家一起来学习生物医学研究的新热点——细胞焦亡本文普拉特泽生物细胞实验平台给大家详细分享,文尾附有细胞焦亡概述、文献方法打包视频供大家学习,现在我们就来学习细胞焦亡的研究方法与检测方式吧!


        首先是细胞焦亡的特点

        细胞焦亡发生时,细胞会发生肿胀,在细胞破裂之前,细胞上形成凸出物(1早期细胞焦亡),之后细胞膜上形成孔隙,使细胞膜失去完整性,释放内容物,引起炎症反应,此时,细胞核位干细胞中央(1晚期细胞焦亡),随着形态学的改变,细胞核固缩,DNA断裂

        细胞焦亡过程,具有caspase-1依赖性。在外界条件的刺激下,caspase-1前体可以与模式识别受体NLRP1NLRP3等通过接头蛋白ASC变为一个高分子复合物,即炎症小体,也称依赖 caspase-1的炎症小体。细胞在caspase-1激活同时会释放出炎性因子白细胞介素-1β(interleukin-1βIL-1)IL-18,进而吸引更多的炎性细胞,加重炎症反应。焦亡发生时形成子隙,它允许细胞质的内容物,如乳酸脱气酶(lactate dehvdrogenase,LDH)和炎性细胞因子释放,荧光标记的膜朕蛋白V7-氨基放线菌D或碘化丙啶进入细胞。

        其次是细胞焦亡的信号通路

        细胞焦亡属于炎症性死亡途径,按激活机制,可分为Caspase-1依赖和不依赖两种途径。两种途径都是通过切割GSDMD后形成N端游离的肽殷,这一肽殷会诱导细胞形成孔道并导致细胞破裂,释放胞质成分。两种途径都能同时诱导IL-1BIL-18的前体进行切割,形成成熟的IL-1IL-18。不同的只是是否直接激活Caspase-1

        然后就是我们本文的重点,细胞焦亡的研究方法:

        细胞焦亡的机制中GSDMD的切割,IL-1BIL-18前体的切割成熟和释放是关键信号,因此证明所诱发的细胞死亡方式是否为细胞焦亡,需要几个关键的实验证据:

        (1)GSDMD的切割(Western检测);

        (2)Caspase的激活,主要是Caspase-1Caspase-4Caspase-5Caspase-11(Western检测);

        (3)IL-1βIL-18前体的切割成熟和释放(WesternELISA);

        (4)细胞形态学检测(CCK-8);

        (5)染色质完整性检测(Tunel)

        而细胞焦亡完整检测方式如下:

        1、形态变化

        (1)扫描电镜观察细胞形态;

        (2)免疫荧光染色(GSDMD/GSDME);

        (3)Tunel检测;

        2、检测焦亡相关基因及蛋白

        (1)q-PCR/Western Blot方法检测焦亡相关基因或蛋白的表达水平(例如,Caspase-14511;GSDMD;Cleaved Caspase-3IL-1BIL-18NLRP3ASC);

        (2)ELISA试剂盒检测炎症因子的水平;(3)CCK8法测定细胞活力;

        (3)免疫组化检测组织蛋白的表达。

        细胞焦亡的研究方法与检测方式我们就讲完啦,想学习更多细胞焦亡内容的可点击《细胞焦亡专题》全面学习呀,有更多的建议或者关于细胞焦亡研究内容的补充欢迎给客服留言,欢迎探讨哦。