发光生物

在自然界当中存在着各种各样的发光生物，比如这个图，比如是发光的节虫，发光的真菌，萤火虫，海肾，海星等等，很漂亮，也很神奇。

双荧光素酶发光的化学原理反应底物与发光机制：

我们来学习一下荧光素酶发光的化学原理，上面这个图是萤火虫荧光素酶催化的化学反应，底物是萤火虫荧光素在atp和氧气存在的条件下，经过萤火虫荧光素酶以及镁离子的催化，可以产生一系列的化合物，同时释放出光信号，上面这个是很深的发光机制，原理差不多大家了解一下就行。

（萤火虫萤光素酶）

（海肾萤光素酶）

双荧光素酶报告基因系统的两种类型：分为双质粒系统和单质粒系统

双质粒系统我们用的比较多的是pGL3家族以及对照指令PRL-TK ，PRL-TK是海肾荧光素酶作为报告基因的指令，作用是作为对照组，pGL3是萤火虫荧光素酶作为报告基因的指令，作为实验组，我们根据不同的实验需求，可以选择不同的指令，

单质粒系统在哺乳动物当中如下图所示，用的是psiCHECK™-2，它的启动子sv40 hsvm-tk，我们可以看一下，都是比较常见的启子，在这个系统里，我们编辑的是海肾荧光素酶，他作为主要的报告基因，目的基因是被克隆到海肾荧光素酶翻译终止密码子下游的多克隆位点，我们只用目的序列来替代掉sv 40的启动子序列，而萤火虫荧光素酶是补做编辑的，作为数据校正的一个工具，它主要就是排除细胞活性，传染效率等因素对实验的影响

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