大家好，今天继续跟普拉特泽生物一起学习巨噬细胞实验中的——巨噬细胞极化实验。巨噬细胞功能极化对机体抗病原菌感染及损伤修复的质量和效率具有重要作用，巨噬细胞功能极化对机体抗病原菌感染及损伤修复的质量和效率具有重要作用。巨噬细胞的分型、极化实验都具有较高的实验门槛，也很受到国自然项目的支持，因此很受各位科研人员的喜爱，普拉特泽生物流式检测平台专业为大家提供巨噬细胞实验外包服务，一起来看看步骤吧！

        免疫效应细胞在免疫反应中并非是表型单一的活化细胞，在局部微环境因素的影响下，活化的细胞分化成具有不同表型的亚细胞型。这些亚型细胞适应局部环境同时又是局部环境不可或缺的组份。它们分布不同，表型特征有别:表达不同的表面分子，分泌不同细胞因子，功能也不同。典型的例子是Th细胞的极化，而近年来人们逐渐发现活化巨噬细胞有类似现象，成熟巨噬细胞能在各种因素诱导下出现表型和功能分化，即极化现象。

        1、原代巨噬细胞的获取：

        （1）处死小鼠，用取骨镊和手术剪。剪开小鼠皮肤，取小鼠两条后腿并剔除骨上的肌肉，然后浸泡在含1%双抗的PBS中。

        （2）在小鼠腿骨的一段剪一个小口，然后用5mL含1%双抗的PBS冲洗骨髓细胞。用1mL枪尖吸取冲洗的细胞液，100目滤膜过滤到新的离心管。然后300 xg ，离心5分钟，去上清液。

        （3）用1-5 mL红细胞裂解液重悬细胞，冰上裂解5 min（期间适当震荡一下），300 xg 离心5分钟去上清液。再用PBS清洗一次，并计数细胞数目，取1*106个细胞铺6孔板每孔。

        （4）用RMPI-1640完全培养基（10%胎牛血清，100x双抗，M-CSF：10 ng/mL，1:10000稀释原液）中培养。每两天换一次液，培养一周后诱导出巨噬细胞。采用CD11b、F4/80流式抗体进行染色验证。

        2、巨噬细胞极化实验：

        （1）取对数生长期，状态较好细胞（原代巨噬细胞或者RAW264.7细胞株）铺板每孔1*106个细胞。

        （2）加入LPS（100ng/mL）、INF-γ（40ng/mL）诱导为M1型巨噬细胞；加入IL-4（100ng/mL）诱导为M2型巨噬细胞。细胞因子同培养基一起加入。

        （3）诱导12小时后。收集细胞，提RNA，RT-PCR检测M1型关键标志物：TNF-a、iNOS；M2型标志物Arg-1的基因表达水平。

        （4）或者收集细胞后，流式抗体染色M1型（染色抗体：CD11b、F4/80、CD206）；M2型巨噬细胞（抗体CD11b、F4/80、CD86）流式上机检测。

        那诱导巨噬细胞极化实验介绍与步骤就说到这里啦，如果您对巨噬细胞还有更多的疑问研究或有巨噬细胞实验外包得需求，欢迎随时咨询，普拉特泽生物一直在线的哦~