大家好呀，前面给大家分享了Co-IP实验的原理、步骤和注意事项，今天咱们来学习的就是Co-IP实验过程和结果中容易出现的问题以及解决方法。本文由普拉特泽生物分子检测中心的技术小哥哥小姐姐们经过大量实操经验总结而来，不听错过一个亿哦。普拉特泽生物专业承接包括Co-IP代做等各种分子检测实验外包服务，服务快周期短，来pick一下我吧。

   链接奉上，大家自行复习哦！：

   《Co-IP免疫共沉淀实验——原理介绍》
   《Co-IP免疫共沉淀实验——操作步骤》
   《Co-IP免疫共沉淀实验——注意事项》

   Co-IP免疫共沉淀常见问题及解决方法：
   一、实验结果高背景

   原因1：制备样品中可能有不完全溶解的大的蛋白复合体

   制备样品后进行短暂超声处理（3次，每次5秒钟），然后离心纯化，取上清后进行后续实验

   原因2：洗涤不彻底

   多次洗涤，并逐渐增加洗涤缓冲液中的NaCl和去垢剂浓度

   原因3：非特异性蛋白吸附于珠子上

   进行Preclearing以排除非特异性吸附

   原因4：抗体本身特异性不好

   选择合适的抗体，可以考虑单抗

   原因5：使用了太多的抗体

   进行条件优化减少抗体

   原因6：使用了过多的细胞或组织进行裂解

   减少样本量，我们推荐100-500μg细胞裂解物

   原因7：抗原降解

   保证样品中加入了蛋白酶/磷酸酶抑制剂，尽量使用新鲜制备的样品

   原因8：WB步骤出现错误或不规范

   使用规范的WB,注意封闭、一二抗稀释的条件

   二、无信号

   原因1：目的蛋白在样本中表达量低或者不表达

   首先对目的蛋白表达量进行检测，或者加大IP中加入的蛋白裂解物并进行预处理。

   胞内蛋白互作的水平较低或没有互作，增加蛋白裂解物或进行诱导处理。

   原因2：细胞裂解液使用不当

   根据实验需要选择，慎重考虑。

   原因3：目的蛋白未被洗脱

   保证使用合适的洗脱液，保证洗脱液的强度和pH值合适。

   原因4：抗体没有很好的与珠子相互结合

   选择合适的珠子。

   原因5：抗体选择不当或者不工作

   利用WB对抗体进行验证

   原因6：抗体使用不足

   查阅文献或者说明书，并多次优化或选择合适的抗体使用量。
   那么关于Co-IP实验操作过程和结果常见的问题以及解决方法我们就介绍完啦，想学习详细Co-IP免疫共沉淀实验的操作过程的同学欢迎点击：《Co-IP 理论+实操》详细学习哦！