CHIP实验操作步骤由普拉特泽生物分子检测平台和线上培训品牌《春风学院》总结分享，文章末附上chip实验原理与操作视频教程，普拉特泽生物承接线下chip实验代做上千例，积累了想当结实的理论基础与实验操作经验，专业代做各种生物医学实验，为科研工作者的枯燥实验生涯提供真诚的帮助，如果您也有chip实验外包需求，一定要考虑普拉特泽哦。

   下面我们就来看看chip实验的详细操作步骤吧！

   第一步、细胞的甲醛交联与超声破碎。

   （1）取出细胞，加入甲醛，使得甲醛的终浓度为1%。

   （2）37℃孵育10 min。

   （3）终止交联。

   （4）吸尽培养基，用冰冷的PBS清洗细胞2次。

   （5）细胞刮刀收集细胞于15 mL离心管中。预冷后离心收集细胞。

   （6）倒去上清。

   （7）超声破碎。

   第二步、除杂及抗体哺育

   （1）超声破碎结束后，离心去除不溶物质。

   （2）在100μL的超声破碎产物中，加入900μLChIP Dilution Bufer 和20μl × PIC。再各加入60μL ProteinA Agarose/Salmon Sperm DNA。4°C颠转混匀1h。

   （3）1h后，在4摄氏度静置10 min沉淀，700 rpm离心1 min。

   （4）取上清。各留取20 μL做为input。一管中加入1 μL抗体，另一管中则不加抗体。4°C颠转过夜。

   第三步、检验超声破碎的效果

   （1）取100 μL超声破碎后产物，加入4 μL5M NaCl，65°C处理2h解交联。分出一半用酚/氯仿抽提。

   （2）电泳检测超声效果。

   第四步、免疫复合物的沉淀及清洗（第二天）

   （1）孵育过夜后，每管中加入60 μLProteinA  Agarose/Salmon Sperm DNA。4°C颠转2h。

   （2）4°C静置10 min后，离心除去上清。

   （3）清洗沉淀复合物。清洗的步骤:加入溶液，在4°C颠转10 min，4°C静置10 min沉淀，700 rpm离心1 min，除去上清。

   （4）清洗完毕后，开始洗脱。

   （5）解交联:每管中加入20 μL 5M NaCl（NaCl终浓度为0.2M）。混匀，65°C解交联过夜。

   第五步、DNA样品的回收（第三天）

   （1）解交联结束后，每管加入1μL RNaseA(MBI) ，37°C孵育1h。

   （2）每管加入10 μL 0.5M EDTA，20μL 1M Tris-HCl（pH6.5），2 μL 10mg/mL蛋白酶K。45°C处理2h。

   （3）DNA片段的回收omega胶回收试剂盒。最终的样品溶于100μL ddH2O。

   第六步、PCR分析 

   令人秃头的ChIP实验，小编就先介绍到这啦~

   ChIP实验遇到困难的，对ChIP实验感兴趣的，准备学习ChIP实验的朋友们，欢迎点击：《CHIP理论+实操》

   快去学习吧！