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一张图搞懂qPCR实验中CT值的定义

2026-02-10 17:14:15

来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台


先看懂qPCR扩增曲线的一生

这是 qPCR 扩增的全过程,分 3 个阶段:

1. 起始期:刚开始循环,DNA 刚复制,荧光信号弱,和背景噪音差不多,仪器检测不到明显变化;

2. 指数期DNA 片段以 2ⁿ的速度快速复制,荧光信号呈指数增长,这个阶段的扩增效率最稳定,是最能反映模板初始量的阶段;

3. 平台期:原料耗尽,扩增减速,荧光信号不再增加,曲线趋于平缓。

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CT 值

CT 值:“荧光达标” 时的循环数。上图中那条灰色的阈值线(Threshold),是仪器设定的可检测荧光信号阈值。CT 值(Cycle Threshold),就是荧光信号刚好跨过这条门槛时,PCR 已经跑了多少个循环。

绿色曲线:在更早的循环就达标 → CT 值更小(说明它的初始量多,只需要跑几圈就到阈值线)

 红色曲线:需要更多循环才能达标 → CT 值更大(说明它初始含量低,需要多跑几圈才能到阈值线)。

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CT 越小,初始基因越多

qPCR 的定量原理很直接:如果样品里的目标基因初始含量越高,DNA 复制到 “能被检测到” 的速度就越快,对应的 CT 值就越小;反之,初始含量越低,CT 值就越大。

比如

 过表达(OE)组的 CT 值 < 对照组 → 说明目标基因表达量更高

敲低(KD)组的 CT 值 > 对照组 → 说明目标基因表达量更低

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