
【国自然研究热点文献】之外泌体
2023-03-17 10:39:15
来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台



外泌体是细胞分泌的一种细胞外囊泡,其主要成分是磷脂双分子层,携带大量具有组织或细胞特异性的蛋白质、脂质及遗传物质。其大小为 30-150nm,具有双层膜结构,参与细胞间的分子传递,可调控不同的生理活动。外泌体课题如何设计呢?我们先通过一篇文献来了解一下吧。
本次分享的文献题目是:PTH (1-34) enhances the therapeutic efect of bone marrow mesenchymal stem cell-derived exosomes by inhibiting proinfammatory cytokines expression on OA chondrocyte repair in vitro,影响因子5.606分,2022年4月发表在 Arthritis Res Ther. 杂志上。
来看看文章都主要研究了些啥吧:
一、外泌体的分离及鉴定
首先作者从脊髓间充质干细胞(BMSCs)及甲状旁腺素(PTH)干预的BMSCs中通过超高速离心的方法获得外泌体。粒径分析发现外泌体一般在60~150nm范围内(图1A)。扫描电镜观察结果显示,ExoBMSC和ExoPTH呈典型的碟状或杯状(图1B)。WB检测发现CD9和TSG101在ExoBMSC和ExoPTH中特异性表达(图1C)。用Dil标记外泌体并与软骨细胞共培养后,荧光显微镜下可在细胞质中能观察到红色荧光(图1D),说明ExoBMSC和ExoPTH可被软骨细胞成功摄取。

在补充实验图中,作者发现20 ng/ ml和50 ng/ ml的IL-1β显著抑制软骨细胞的迁移。然而,在10 ng/ml、20 ng/ml和50 ng/ml组之间没有差异。因此,作者选择了20 ng/ml作为IL-1β的干预浓度用于后续实验(补充图2A,2D)。同时,将软骨细胞和BMSCs用不同浓度的PTH干预后发现,10 nM/ml的PTH处理后软骨细胞和BMSCs的迁移率明显高于其他各组。
划痕实验数据显示,ExoBMSC和ExoPTH促进了软骨细胞的迁移(补充图3A和3B)。此外,与ExoBMSC组相比,ExoPTH组迁移率显著增加。CCK-8结果证实,ExoBMSC和ExoPTH均促进软骨细胞增殖,而ExoPTH的促进作用强于ExoBMSC(补充图3C)。
四、ExoBMSC和ExoPTH对骨性关节炎(OA)软骨细胞迁移和增殖的影响
采用流式细胞术检测OA软骨细胞的凋亡情况(图4A)。与ExoBMSC组和ExoPTH组相比,OA软骨细胞凋亡率显著增加。然而,ExoPTH组和ExoBMSC组之间没有显著的差异。

