细胞增殖与细胞活性检测

—— 四大法宝MTT&CCK8&MTS&EdU

小编在大量的客户接洽过程中，发现很多客户爸爸经常混淆细胞增殖或细胞活性这两个概念。其实应为..确实挺容易混淆的哈哈哈哈哈！

因为检测手段和检测原理十分相近，所以经常被忽略二者概念上的区别。但是！我们还是要知道细胞增殖能力，以及细胞活性的区别，才能更好的利用实验方法去达到检测目的不是嘛。

我们先了解一下细胞增殖和细胞活性这两个基本概念：

细胞增殖是活细胞的重要生理功能之一，是生物体的重要生命特征 ，是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。细胞增殖是指细胞在周期调控的因子下，通过DNA复制等反应，完成细胞分裂的过程。增殖检测一般是分析分裂中的细胞数量的变化，进而反应细胞的生长状态及活性，细胞增殖检测主要分为四类：DNA合成检测、代谢活性检测、细胞增殖相关抗原检测和ATP浓度检测。

细胞活性是判断体外培养细胞在某些条件下是否能正常生长的重要指标，如药物处理、放射性或紫外线照射、培养条件变化等。细胞活性检测指标通常包括细胞膜对核酸染料的通透性、代谢活性、膜电位等。

细胞活性的检测相当于细胞增殖能力的测定，采用特殊的试剂测定细胞的代谢活力或细胞代谢产物，通过检测细胞的氧化还原活性反映细胞增殖能力，属于间接检测细胞增殖能力的方法。

细胞增殖的研究方法有很多，主要包括:MTT、MTS、CCK8、Edu等，其中EdU检测方法是最新的细胞增殖检测方法。

今天，主要想给大家介绍一下MTT、CCK8和MTS。

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MTT：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

CCK8：在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

MTS：是一种在MTT基础上的改良试剂，含有一个新型的四唑化合物和一种电子偶联剂（ｐｈｅｎａｚｉｎｅ　ｅｔｈｏｓｕ一种有色的甲臜产物，可直接溶解于培养基中。这种转化是在代谢活跃的细胞中的脱氢酶产生的NADPH或NADH的作ｌｆａｔｅ，PES），PES具有增强的化学稳定性，这使它可与MTS混合形成稳定的溶液。MTS被细胞生物还原成为用下完成的。在490 nm处检测到的甲臜产物的量与培养中的活细胞数成正比。

为了让大家更直观的了解到这三种检测方法的联系与区别，我们采用了列表的方法：

除了这三种最常见的检测方法以外，还想给大家介绍一下最新的细胞增殖检测方法——EdU检测方法。

EdU：是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子，通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料在细胞内很容易扩散，无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)即可有效检测，可有效避免样品损伤，在体外细胞和体内组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。

当您根据具体的实验情况选择了合适的检测方法的时候，发现检测结果还是不理想，问题出在哪呢？

下面小编为您整理了以下实验操作注意事项，希望能对您有所帮助：

1 、铺板

细胞数量：在前期细胞培养中，观察细胞贴壁率、贴壁后面积大小倍增时间；以确保处理过程中不会细胞过满（铺板太密或长太久，细胞都会挤死掉的！），准确呈现处理因素与细胞数的关系（5×103 ~10×103 ）。意思就是先了解下你需要检测的细胞，做个预实验先。

2、避免血清的干扰

用含胎牛血清培养基培养细胞时，高浓度血清物质（我也会吸光哒！）会影响试验孔的吸光度值，降低实验敏感度。

3、防止边缘效应及复孔设置

应在96孔板边缘滴加PBS（别省那点板子啊！），边缘孔的水分挥发较快，药物易被浓缩，对实验影响很大。复孔，做3-5个，推荐5个（别省那点板子啊！）。