大家好！今天普拉特泽生物跟大家一起学习一个新的实验，DNA pull-dwon实验，实验介绍由普拉特泽生物分子检测平台总结分享，分子检测平台专业承接DNA pull-down实验外包，为广大生物科研路上的研究人提供实验上的帮助。

  DNA Pull down实验是用脱硫生物素标记特异性DNA探针，脱硫生物素探针可以和偶联在磁珠上的链霉亲和素亲和结合。提取物与磁珠-DNA探针孵育，作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合；经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除；用 Western Blot或质谱对产物进行检测分析。

        一、实验流程

         一般来说，该实验首先，需要针对待研究目的基因的调控区域设计并制备特异性探针（以脱硫生物素标记为主流）；同时，制备细胞核提取物；将探针和核提取物共同孵育，DNA结合蛋白就会和靶向序列特异性结合；然后，通过亲和素磁珠纯化蛋白质DNA复合物；最后针对获得的蛋白，使用Western blot验证或者质谱方式鉴定蛋白质类型。

       二、 DNA pull-down技术应用

        DNA pull-down以感兴趣的DNA序列为探针，寻找与该序列结合的蛋白质，最常见的应用是寻找某特定基因启动子区域的转录因子。

        a. DNA Pull down WB，用于检测目标DNA序列与某样本中的待测蛋白是否存在相互作用；

        b. DNA Pull down MS，用于筛选目标DNA序列与某样本中的哪些蛋白具有相互作用。

        三、RNA pulldown优缺点：

        ①　富集分析低丰度蛋白；

        ②　探针制备简便，周期短；

        ③　获得特异性蛋白与下游蛋白质检测技术兼容；

        缺点：

        ①　长连探针往往存在非特异结合现象；

        ②　反应条件要求无核酸酶；

        ③　体外实验，相对体内实验存在一定弊端；

        四、RNA pulldown实验步骤

        1.探针设计及标记

   2.样本前处理

   3. Pull down

   4.蛋白质检测-- Western blot

   5.蛋白质检测-- MS

   好啦，DNA pull-down实验就简单介绍到这里啦，结尾给大家简单介绍了一下实验的框架流程，下期根据这个流程给大家详细分享DNA pull-down实验的详细步骤，如果您也对DNA pull-down实验感兴趣或有DNA pull-down外包的需求，欢迎选择咱们普拉特泽生物！下期见~