动物细胞传代培养详细操作步骤由普拉特泽生物总结平台分享。普拉特泽细胞实验平台专业提供各类细胞实验外包服务，细胞的分离培养传代作为所有细胞实验的基础让然是不在话下，传代培养是细胞培养常规保种方法之一，也是所有细胞生物学实验的基础，上期我们以小鼠为例介绍了原代细胞取材培养的操作步骤，今天咱们就来看看和传代细胞的培养是哪些步骤跟注意事项吧！

   动物细胞传代培养操作步骤如下：

        1、观察培养基是否正常，细胞状态如何，细胞密度如何，决定是否传代。观察时拧紧盖子。

          2、加热PBS、versene、培养基，(提前做好) 瓶子不要倒着放，不要让液体接触到瓶塞。

        3、打开超净台(先开风机，后开照明)，用75%乙醇清洁台面，点燃酒精灯。不要把废液缸拿出去倒，如果废液太多，可以用其他容器先装废液。取小离心管一个，置于架子上。

        4、取尖吸管、吸量管各一支，放置在专用的架上。放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要与架子接触。

        5、取待传代的细胞。打开versene，用酒精灯外焰烧。烧吸管时距离酒精灯心远些，不要把渣滓带进去。把试剂拿入台子的时候，尽量平稳，不要让试剂碰到瓶口。

        6、用吸量管吸取旧的培养基，置离心管中，吸量管加入versene，然后将versene瓶收起来。(加versene主要是为了将旧培养基洗去)。在离心管中间部分将液体加入。吸液体和加液体时都不要对着细胞。

        7、打开胰酶，然后将versene弃掉。换新管，用尖吸管吸取适量胰酶加入。加胰酶后，尽快放平，使细胞消化时间一致。

        8、将细胞放入37度孵箱。放孵箱2min, 收胰酶，打开PBS. 之后拿出来镜下随时观察。使用二次消化法，去除容器中残余的细胞，别忘了用旧培养基中和。

        9、取细胞，镜下观察消化情况。消化程度合适之后(细胞变圆，但不漂起)，用尖吸管弃去胰酶，取离心管中的培养基加入细胞，吹打，至所有细胞从培养皿底部脱落下来。用PBS洗细胞，versene对细胞有毒性，且不能被血清中和。然后吸取至离心管中，800 rpm离心5分钟。

        10、吸量管吸取适量培养基加入新的培养皿中。

        11、细胞离心毕，用吸新培养基的管弃去上清，先把泡沫吸走。换吸量管吸取培养皿中培养基适量，加入离心管，小体积混匀，将细胞重悬，尖吸管吹匀。

        12、擦计数板，用枪吸10ul的液体，计数。不要把枪伸到离心管内。

        13、吸量管吸取细胞悬液，加入新的培养皿中。镜下观察，摇匀，放入37度孵育。收超净台。

        那动物细胞传代培养时需要注意哪些注意事项呢？

        1、严格保证无菌操作：细胞离体后非常脆弱，容易被细菌、真菌、支原体等感染，且细菌生存能力强，一般的细菌传一代只有十几分钟而细胞却需要好几天，培养基中的营养物质会被细菌消耗殆尽，而且细菌等在生长过程中分泌的毒性也会造成细胞的死亡，使传代失败。

        2、控制消化时间：细胞消化过度会导致相当一部分细胞损伤和死亡，如果细胞团中都是死细胞，则不会贴壁；如果细胞团中仍存在有活力的细胞，就会贴壁造成局部细胞密度不均匀，该局部较快形成中央坏死细胞区，难以培养传代失败。

        3、及时关注细胞生长状态：日常观察培养液的颜色与透明度、细胞形态变化、细胞污染的观察及防治、细胞生长状况。

        好啦，动物细胞的传代细胞培养详细的操作步骤咱们就全部讲完了，如果您有细胞实验外包代做或关于细胞实验有相关的技术问题需要咨询的话欢迎给咱们留言，细胞平台的技术小哥哥姐姐非常乐意给大家进行技术上的交流与科研上的协助！

        那我们下期见~

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