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HE染色实验问题答疑【附视频教程】

2022-06-17 15:48:00

来源/作者:普拉特泽-病理染色技术平台

        大家好!HE染色实验问题答疑由普拉特泽生物为大家总结分享,文末附有HE染色视频供大家学习。HE染色作为病理观察最常见的染色实验,虽然普遍但新手村实验员们也总容易有各种稀奇古怪的问题,普拉特泽生物病理实验平台今天就给大家统一回答!


        Q1:红蓝失调怎么办

        A(1)偏蓝色:苏木素染色过深,分化不够;伊红试剂过期;伊红染色时间太短,分化过度。

              (2)偏红色:苏木素染色过浅,分化过度;组织固定不佳,细胞核不着色;脱蜡不彻底,苏木素染不上苏木素氧化成熟不够;伊红染色过深,分化不足。

        Q2:细胞核染色过浅,颜色暗淡怎么办?

        A:造成这种情况的原因是切片在苏木素染液中停留过短,或苏木素过度氧化失效,或分化时间太长。

        解决办法:重新染色。将组织切片放入0.01%氢氧化钠、0.5%氨水、饱和的碳酸氢钠溶液、乙醇溶液,每个3-5 min即可,接着重新染色。适当增加组织的嗜碱性以增强核染色,如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氢钠溶液中3 h,自来水冲洗5-10 min染色,或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氢钠溶液中1h,自来水冲洗10 min染色。

        Q3染色时切片脱落的原因以及应对措施

        A(1)血栓、坏死或硬度较大的组织本身在染色时就极易脱落,应小心操作。

              (2)组织脱水、透明不佳,石蜡未完全渗入,脱蜡时组织收缩,复水时组织又吸水膨胀,造成脱片还可能是组织脱水、透明过度,且浸蜡温度过高,导致组织变硬变脆,既不容易切片也极易在染色过程中脱片。对策:发脆发硬的组织可用棉签蘸5%氨水或2%冰醋酸溶液涂抹在组织表面10-15秒。然后精修出组织面,放入冰水混合物中泡1 min,再切片。

              (3)切片太厚切片破碎,不整齐展片时水温过低,展片不充分导致组织与玻片贴合不紧密烤片时间和温度过短过低,或过久过高,一般使用防脱玻片烤片仅需30 min即可。

               (4)染色前入水步骤不够,组织吸水后快速膨胀,导致脱片;染色过程中漂洗粗暴,振荡过度;反蓝时间太久,反蓝液碱性过强,可以采用自来水反蓝,一般自来水PH7.5-7.8,效果很好。

               (5)1%盐酸乙醇分化时脱片。分化的原理是利用盐酸电离出的氢离子,改变组织表面电荷,使得吸附的染料脱落。由此看来,乙醇的作用并不大。并且分化液中的乙醇会使组织快速脱水而收缩,在随后漂洗时组织又快速吸水膨胀,极易脱片。因此完全可以改用1%盐酸水溶液作为分化液。


        Q4:成片的染色模糊不清,灰染

        A(1)组织未及时固定,部分自溶;或固定不佳,深部组织未处理到。这种只能重新固定了。

              (2)尽管乙醇也是一种固定液,但尽量少用或不用,因为其会导致组织发硬变脆,染色效果不好。

              (3)包埋时蜡的温度过高,或切片后烤片时间和温度过久过高都不好,可能会导致无法染色。

              (4)脱蜡不彻底染料有问题;分化过度导致的颜色变淡,镜下组织界限不清染完后的脱水和透明不佳,水雾残留在组织上。

              (5)通风窗中(防止空气中的水雾),戴口罩操作封片(减少哈气带来的水雾)

        Q5:不管怎么操作,始终无法染色或淡染

  A:这种情况一般因为组织固定时采用了酸性甲醛或者组织在甲醛中浸泡时间太长或者久置的甲醛变性分解为甲酸。

              补救:防患于未然,要么使用新鲜的中性甲醛固定,要么在存放的甲醛中加一点碳酸钠中和甲酸。对于已经固定的组 织可考虑再次固定;对于已经制出的片子,染色前采用5%重铬酸钾溶液浸泡半小时以上,然后自来水漂洗5min,可改善染色。也可以将切片放入3%硫酸铁铵溶液中,补充染色媒介,增强苏木素与组织的亲和力(苏木素染色必须要媒介才能染上,单纯的苏木素与组织的亲和力很弱)

        Q6:染色前烤片温度、时间对HE染色的影响?

  A:肯定有影响。最佳时间是60℃25min即可。可活动至60-75℃25-30min

        Q7:可以把HE切片洗去做其他染色吗?
  A:可以,这种情况一般适用于组织量较少,或较珍贵时操作。

        好啦,HE染色实验的问题答疑就解释到这里啦!还有什么不明白的可以留言技术会一一详细解释的哦。想跟深入视频学习的点击:HE染色理论+实操》